Тиаминовые ферменты - Кочетов Г.А.
Скачать (прямая ссылка):
Одновременно и независимо аналогичные данные о субъедпничной структуре пируватдекарбоксилазного компонента пируватдегидрогеназного комплекса получены в лаборатории С. Е. Северина с ферментом, выделенным из грудной мышцы голубя [69]. Под действием дочецилсульфата натрия мышечная пнруватдскарбокси-лаза распадается на субъединицы с мол. весом 12ООО и 37 000. Мол. вес нативного фермента был определен ранее равным 156000 [68, 404], из чего авторы делают естественное предположение о субъедпничной структуре типа с^р*. Интересные данные получены при гельфнль-трацни пируватдекарбоксилазы грудной мышцы голубя па сефадексе G-200 [68]. Фермент элюировался с колонки одним несимметричным белковым ником, но тремя достаточно четко отграниченными инками активности. Положение пиков соответствовало мол. весам 156000, 104 000 и 68 000. Напрашивается предположение, что в Чайном случае три формы фермента — тетрамер, тример и димер — находятся в равновесии.
Таким образом, все три фермента, выделенные пз разных тканей животных, оказались близкими по своей структуре. Несколько особняком в этом списке стоит пируватдекарбоксилаза, изолированная из пируватдегидрогеназного комплекса сердца свиньи. Хотя
51
мол. вес ее равен 153000 [293, 294], т. с. примерно такой же, как и трех вышеупомянутых ферментов, но состоит она из двух идентичных субъединиц [294]. В этом смысле она напоминает фермент, полученный из Е. coli.
Методом гельфильтрации показано, что оксоглу-таратдекарбоксилаза, изолированная из okcoi лутарат-дегидрогеназного комплекса грудной мышцы голуби, находится в растворе в виде активных олигомерных форм с мол. весом 335 000, 255 000 и 175 000 [10]. Путем экстраполяции к бесконечному разведению получено значение минимального мол. веса, равное 85 000. Это как будто бы указывает на то, что активные формы фермента представляют собой соответственно тетрамер, тример, димер. Зависимость величины коэффициента седиментации от концентрации фермента в растворе дает основание полагать, что активные олигомерные формы оксоглутаратдекарбоксилазы находятся в состоянии равновесия. Диск-электрофорез в полиакриламидном геле фермента, обработанного додецилсульфатом натрия, подтверждает наличие компонента с мол. весом 85 000. Наличие активных олигомерных форм оксоглута-ратдекарбокенлазы (изолированной из оксоглутарат-дегндрогеназного комплекса), построенных нз идентичных или очень близких по свойствам субъединиц, подтверждено и в дальнейших исследованиях [50]. Заметим, что мол. вес субъединиц оксоглутаратдекарбоксилазы, изолированной из оксоглутаратдегидрогеназного комплекса Е. coli, равен примерно 95 000 [382].
В настоящее время мы располагаем лишь отрывочными данными о субъединичной структуре тиаминовых ферментов (табл. 2). Тем не менее их предварительная оценка представляет опредслечный интерес. При сопоставлении данных, представленных в табл. 2, обращают на себя внимание три обстоятельства: 1) близкие величины молекулярных весов нативных ферментов; 2) практически идентичные свойства ппруватдекарбокенлаз, выделенных из грудной мышцы голубя, почек и сердца быка. Все они имиот мол. вес около 155 000, состоят из неидентичных субъединиц с мол. весом соответственно 42 000 и 37 000 и построены по типу a2JV, 3) фермент из растений представлен одной субъединицей, ферменты нз микроорганизмов—двумя идентичными, а нз животных тканей — двумя парами непдентнчных субъединиц.
52
Таолици 2
Молекулярный вес некоторых тиаминовых ферментов и их субъединиц *
Фермент Источник Мол. вес Воздействие Количество Мол. вес Литературный
нативного фер субъединиц субъединиц источник
мента
Транскетолаза Пекарские дрожжи 158 ООО гх ** 2 5 000 [П9]
То же То же 159 ООО pH 12 2 80000 [2]
» Эритроциты человека 136 ООО --- --- --- [218]
» Листья шпината 100 000 ДСН *** 1 100 000 [5-9]
Пируватдекарбоксилаза Пивные дрожжи 175 000 гх ** 2 90 000 [512, 516]
То же Пекарские дрожжи 200 000 pH 7->8 2 100 000 [177]
Пируватдекарбоксилаза из Е. coli 192 000 pH 7,0 -»9,5 2 96 000 [142, 150]
пируватдегидрогеназного Сердечная мышца свиньи 153 000 2 77 000 [206, 294]
Грудная мышца голубя 150 000 лен*** 4 (ар, аР) 42 000 [68, 69]
37 000
Почки и сердечная мышца 154 000 ДСН *** 4 (оф, оф) 42 000 [84]
