Биогенный магнетит и магниторецепция. Новое о биомагнетизме. Том 1 - Киршвинк Дж.
ISBN 5-03-001274-5
Скачать (прямая ссылка):
как воду отсосали, пластинку с покрытыми пленкой сетками осторожно удаляют и высушивают на воздухе в защищенном от пыли месте.
Высушенные на воздухе сетки могут быть использованы как подложки для образцов. Однако для их укрепления и для того чтобы избежать зарядных эффектов в микроскопе, желательно напылить на их поверхность тонкий слой углерода. Тонкую углеродную пленку наносят в высоковакуумной напылительной установке, являющейся стандартной принадлежностью большинства электронно-микроскопических лабораторий. О количестве углерода судят визуально по мере его нанесения. Прежде чем откачать воздух из колоколообразного сосуда вакуумного испарителя, рядом с сетками помещают небольшой кусочек белой глазурированной кафельной плитки, в центр которого наносят каплю масла для диффузионного насоса. При испарении углерод будет оседать на всей поверхности кафеля, не прикрытой масляной каплей, и, следя за интенсивностью окрашивания, экспериментатор может контролировать толщину слоя напыленного углерода. Желательным является слабосерое окрашивание.
Углеродные пленки (и в меньшей степени пластмассовые) гидрофоб-ны. Это нежелательное свойство затрудняет однородное наслаивание диспергированного материала водных суспензий. Поэтому перед нанесением образца углеродные полимерные подложки необходимо дополнительно обработать. Важность этого этапа в исследованиях с помощью просвечивающей электронной микроскопии тонкодисперсного материала бесспорна. Время, затраченное на придание поверхности сетки гидрофильных свойств, окупается с лихвой.
Различные руководства предлагают множество способов устранения несмачиваемости, вызванной гидрофобностью поверхности. Наиболее чистым и надежным является редко описываемый методический прием: ионная очистка в высокочастотном газовом разряде. Лучше всего этот процесс протекает сразу после покрытия сеток углеродом. Если вакуумный испаритель оборудован «ионно-очистным» трансформатором, его включают после прекращения работы диффузионного насоса, когда под колокол проникает немного воздуха, и начинают новый цикл. При отсутствии встроенного трансформатора сходного результата достигают приложением к внешнему вводу колокола управляемой вручную высокочастотной индукционной катушки Тесла. Голубоватый газовый разряд выглядит по-разному в зависимости от степени вакуума. Как и в случае ионизационного счетчика, он будет слабым и при слишком низком, и при слишком высоком вакууме. С помощью метода проб и ошибок исследователь может найти наилучшие условия обработки сеток. Сетки подвергают обработке в течение 30-60 с. После этого они пригодны для использования и могут быть извлечены из прибора. Если сетки не используют в течение примерно недели, то может потребоваться их повторная обработка.
2.4. Нанесение образца на подложку
После того как образец получен в виде водной суспензии, его помещают (в соответствующем количестве) на поверхность сетки для исследования в электронном микроскопе. При этом возникает необходимость в разработке способов удерживания сеток. При использовании пинцета могут возникать осложнения, в особенности в случае магнитных материалов. Лучшим способом является следующий. Сначала на чистое предметное стекло накладывают небольшую полоску двусторонней липкой ленты. Затем отдельные покрытые пленкой и ионизированные опорные сетки прикладывают к самому краю ленты таким образом, чтобы удержать их на месте и в то же время чтобы они были на достаточном расстоянии друг от друга. После этого на сетки можно наносить образцы.
Исследуемый материал должен быть хорошо диспергирован в определенном количестве дистиллированной воды. «Соответствующую» концентрацию определяют экспериментально, визуально оценивая на просвет оптическую плотность раствора в 5-миллилитровой центрифужной пробирке. Если суспензия оказывается слишком светлой, твердые компоненты можно переосадить в клинической центрифуге. Если суспензия выглядит слишком темной, ее можно развести.
Перед нанесением образца на сетку центрифужную пробирку, содержащую образец, следует на короткое время поместить в ультразвуковой диспергатор, чтобы быть уверенным в дезагрегации минеральных частиц. Это может быть особенно важно в случае магнитных частиц, которые имеют тенденцию слипаться и образовывать вытянутые цепочки.
При помощи чистой стеклянной пипетки на ионизированную поверхность сетки наносят небольшую каплю диспергированного материала. Если поверхность достаточно гидрофильна, то маленькая капля будет иметь низкий уплощенный менисковый профиль, если же она гидрофобна, то капля будет высокой. В последнем случае обычно не рекомендуется производить дальнейшие операции, поскольку при высыхании образец распределится по поверхности сетки неравномерно. Частицы будут смещаться к краям сетки или образовывать плотные скопления. Поместите сетки с нанесенным образцом в атмосферу светящегося ионного разряда (разд. 2.3). Если капля приобретает уплощенный профиль, характерный для гидрофильной поверхности, можно дать избытку воды испариться на воздухе или в случае суспензий с высокой концентрацией частиц можно осторожно удалить воду прикладыванием заостренного конца чистой фильтровальной бумаги к краю сетки. При этом капля станет более плоской и равномерно испарится с гидрофильной поверхности, а на сетке останутся хорошо диспергированные частицы. После полного высыхания сетка готова для электронно-микроскопического исследования. Если вода не высыхает равномерно, но быстро и полностью всасывается в фильтровальную бумагу, то это обычно указывает на слишком большую гидрофобность поверхности сетки. В
