Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка):
о полной идентичности и указывают на присутствие в разных лунках одного и
того же антигена.
Иммунодиффузия, ИЭФ, иммунохимическое окрашивание_____________205
Рис. 6.3. Реакция иммунодиффузии
в геле при расположении луиок в виде кольца демонстрирует, как различные
соотношения антигенов и антител влияют иа расположение и четкость линий
преципитации. Антиген (IgG человека в концентрации 1 мг/мл) помещен в
центральную луику; антитела к IgG, исходное разведение 1 : 20 (верхняя
правая лунка), двукратные разведения по часовой стрелке вокруг лунки
антигена
Рис. 6.4. Результат ДДГ показывает, что в одной из луиок находится чистый
антигеи (верхняя правая луика), а в других ои загрязнен примесями. Во
всех лунках наблюдается реакция идентичности, хотя соотношение между
антигеном и антителами (центральная луика) в некоторых случаях ие дает
четкой линии преципитации. В центральной лунке - антисыворотка против
суммарного пула сывороточных белков человека. Чистый аитигеи - альбумин
III. Полностью, частично идентичные либо неидентичные антигены. На рис.
6.5 показано, как, используя полиспецифи-чеокую антисыворотку
(центральная лунка), исследуют идентичность антигенов, внесенных во
внешние лунки. Использовали два антигена, не дающие перекрестных реакций:
в лунках 1, 2 и 3 - IgG, а в лунках 3, 4 ,и 5-сывороточный альбумин.
Каждый антиген образует преципитат с соответствующими антителами,
диффундирующими из центральной лунки. Около лунок, содержащих один и тот
же антиген, формируются линии преципитации, свидетельствующие о полной
идентичности. Две линии преципитации перекрещиваются между лунками 2 и 3,
что свидетельствует о неидентичности (антигены не имеют общих эпитопов).
В лунку 6 внесены F (ab')2-фрагменты IgG, не содержащие эпитопов Fc-
участка интактной молекулы IgG.
206 Глава 6
Рис. 6.5. Реакция ДДГ свидетельствует о неполной идентичности между
целыми IgG (лунка 1) и Р(аЬ/)а-фрагмеитами (луика 6) при взаимодействии с
антителами к ии-тактным IgG (центральная луика). Положение шпоры
указывает иа то, что иитактиые IgG иесут эпитопы, отсутствующие иа
Р(аЬ')2-фрагмеи-тах. Взаимодействие антител с этими эпитопами продлевает
линию преципитации. Кроме того, линии преципитации свидетельствуют о ие-
идеитичиости между сывороточным альбумином человека (луика 5) и F(ab )2-
фрагмеитами (луика 6), а также между альбумином, смешанным с IgG (луика
3) и IgG (луика 2). IgG в лунках 1, 2 и 3 и альбумин в лунках 3, 4 и 5
полностью идентичны. В центральной лунке - антитела к IgG и альбумину.
Две линии преципитации напротив луики 3 указывают иа присутствие в ней
обоих антигенов
Рис. 6.6. Реакция ДДГ для тестирования специфичиостя аитисывороток.
Рисунок демонстрирует важность использования контрольных антител и
стандартных антигенов для правильной интерпретации результатов.
Пояснения см. в тексте
В результате наблюдается картина неполной идентичности с IgG из лунки 1.
От основной линии преципитации здесь отходит так называемая "шпора";
шпора идет и направлении лунки, содержащей неполный (в отношении
специфичности антител) антиген [F (аЬ')2-фрагменты]. Антитела,
диффундирующие по направлению к лунке 6 и встречающие на своем пути
F(ab')2-фрагменты, обладают специфичностью не только к F(ab)V, но и к Fc-
ynacTKaiM. Молекулы, специфичные к эпитопам Fc-участков, продолжают
диффундировать до тех пор, пока не встретят иитактиые IgG, обладающие Fc-
участками,
Иммунодиффузия, ИЭФ, иммуиохимическое окрашивание
207
с которыми они и связываются. Таким образом, линия преципитации при
взаимодействии IgG с антителами в этом месте образует шпору. Антигены,
находящиеся в лунке 6 [F(ab')2-фрагменты IgG] и лунке 5 (альбумин),
неидентичны.
IV. Специфичность антител. На рис. 6.6 показаны результаты простого
опыта, в котором контрольная (анти-Y) антисыворотка (лунка 5)
сравнивается с двумя исследуемыми ан-тисьмворотжами (лунки 3 и 4). В
центральной лунке находится смесь антигенов, состоящая по крайней мере из
двух компонентов, один из которых представляет собой мишень (Y)
контрольной антисыворотки. В лунку 6 'внесен стандартный очищенный
антиген Y. Линии преципитации между лунками с контрольной антисывороткой
к антигену Y, стандартным антигеном Y и антигеном Y 'В центральной лунке
свидетельствуют об идентичности стандартного антигена Y и того же самого
антигена, содержащегося в смеси. Исследуемая антисыворот-ка 1 (лунка 4)
также содержит антитела к антигену Y, давая реакцию полной идентичности
без дополнительных линий преципитации. Однако исследуемая антисыворотка 2
(лунка 3) содержит антитела, специфичные ко второму антигену,
содержащемуся в смеси. Антиген X выявляется второй (контрольной
антисывороткой, содержащей к нему антитела (лунка 2), которая дает
реакцию полной идентичности с очищенным антигеном X, помещенным в лунку
1. Преципитаты, образуемые двумя антигенами X и Y, совмещаются напротив
лунки 3, однако, как это видно по отсутствию слияния дуг преципитации
