Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 70

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 122 >> Следующая

слияния также были описаны выше.
В отличие от нормальных иммунных клеток ВЭБ-трансфор-мированные лимфоциты
обладают собственной высокой ростовой активностью, поэтому отбор гибридом
может встретить за-
11-997
162
Глава 4
труднения. Однако гибридизацию проводят потому, что клоны не стабильны
или синтезируют мало антител. Именно эти свойства можно использовать при
селекции гибридом для устранения неслившихся клеток, образующих антитела.
В том, что гибридизация прошла успешно, можно убедиться с помощью
кариологического анализа. Однако чаще достаточно просто наблюдать
морфологические изменения, которые вызывает гибридизация ВЭБ-
трансформированных клеток с мышиной, человеческой миеломой или
гетеромиеломой. Лучше всего производить слияние с партнерами, несущими
маркер резистентности, например устойчивости к уабаину.
3.8. Получение моноклональных антител в препаративных количествах
В отличие от гибридом грызунов клетки человека, образующие антитела,
разумеется, невозможно выращивать в брюшной полости сингенного хозяина.
Однако исследуется возможность размножения клеток человека в брюшинной
полости крыс и мышей nude. Большинство же препаратов МКА человека в
настоящее время получают непосредственно в виде культуральной среды. Если
антитела предполагается использовать для диагностических целей,
достаточно просто профильтровать среду через мембрану с диаметром пор 0,2
мкм, чтобы удалить небольшую примесь вируса, который может латентно
инфицировать лимфобластоидные клеточные линии.
Если же предполагается использовать полученные антитела для
парентерального введения, необходимо принять более серьезные меры для
нейтрализации потенциально опасного действия ВЭБ (особенно если больной
находится в состоянии иммуносупрессии). Чтобы инактивировать вирус,
можно, например, подвергнуть культуральную среду или препарат антител
интенсивному ультрафиолетовому облучению.
4. Другие методы получения моноклональных антител человека
Предыдущий раздел может служить руководством для тех, кому необходимо
получить МКА человека. Однако для решения той же задачи существуют и
другие подходы, с которыми читателю целесообразно ознакомиться. В
большинстве других методик используется не ВЭБ-трансформация, а
гибридизация клеток. В некоторых работах свежевыделенные клетки
периферической крови сразу же сливали с перевиваемыми клеточными линиями
[13]. В других - перед слиянием клетки стимулировали митогенами [14]. В-
лимфобласты, очевидно, гибридизуются
Моноклональные антитела человека
163
лучше, чем клетки, находящиеся в состоянии покоя. Однако ни в одной из
упомянутых работ не указана специфичность антител, которые удалось
получить в результате гибридизации. Стремясь увеличить число клеток-
предшественников нужной специфичности, некоторые исследователи пытались,
и, по-видимому, небезуспешно, произвести перед слиянием иммунизацию in
vitro [15]. Для того чтобы еще больше повысить вероятность успеха, такой
подход можно совместить с накоплением В-клеток. образующих антитела
нужной специфичности.
Как уже упоминалось, каждая антигенная система требует своего особого
метода накопления соответствующих В-клеток. Метод накопления нужных В-
клеток с помощью розетирования мы уже обсуждали в связи с получением МКА
к антигену RhD. Данный метод вполне пригоден и для получения МКА к другим
групповым антигенам крови. Для получения МКА к столбнячному анатоксину
был описан другой прием: использовали антиген, конъюгированный с
флуоресцеином, и затем выделяли связавшие метку клетки с помощью
флуоресцентного сортера [16]. Если возникнет необходимость, у
исследователей хватит изобретательности, чтобы разработать способ
выделения В-клеток, специфичных к любой антигенной детерминанте.
Литература
1. Gordon Abdul-Ahad А. К., Hamblin Т. JStevenson F. К-, Stevenson G. Т,
Br. J. Cancer, 49, 547 (1984).
2. Steinitz М., Klein G., Koskimes S., Maekla 0. Nature, 269, 420
(1977).
3. Steinitz М., Sappela I., Eichmann L, Klein G. Immunology, 156, 41
(1979).
4. Robinson Miller G. J. Virol., 15, 1065 (1975).
5. Pickering I. W7., Gelder F. B. J. Immunol., 129, 406 (1982).
6. Kozbor D., Lagarde A. E., Roder J. C. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79,
6651 (1982).
7. Kozbor D., Roder J. C., Chang Т. H., Steplewiski Z., Koprowski H.
Hybrido-ma, 1, 323 (1982).
8. Teng N. N. H., Kaplan H. S., Iiebert J. M. et al. Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 82, 1790 (1985).
9. Moss D. I.. Scott W" Pope J. H. Nature, 268, 735 (1977).
10. Boylston A. W., Gardner B., Anderson R. L" Hughes-Jones N. C.
Scand. J.
Immunol., 12, 355 (1980).
11. Rosen A., Persson K, Klein G. J. Immunol., 130, 2899 (1983).
12. Melamed М., Gordon ]., Ley S. C., Edgar D. H" Huges-Iones N. C. Eur.
J. Immunol., 15, 742 (1985).
13. Croce С. М., Linnenbach A., Hall W., Sleplewski Z., Koprowski H.
Nature, 288, 488 (1980).
14. Chiorazzi N., Wasserman R. L., Kunkel H. E. J. Exp. Med., 156, 930
(1982).
15. Kozbor D" Roder ]. C. Eur. J. Immunol., 14, 23 (1984).
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed