Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка):
частности принадлежащими к столь полиморфной системе, как продукты
главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса II. Несмотря на
многочисленные попытки получения МКА грызунов к антигенам МНС класса II
человека, до сих пор никто не располагает препаратами, способными
дифференцировать частные специфичности этих антигенов, что необходимо для
серотипирования тканей. Ксеноим-мунные антитела не позволяют выявлять и
аллельные варианты антигена D в резус-системе человека. В настоящее время
для определения этого антигена и для иммунотерапии гемолитической анемии
новорожденных ("голубые младенцы") применяют исключительно сыворотку
человека, полученную из крови соответствующих доноров.
Другая область применения МКА человека - это терапия или диагностика
заболеваний путем парентеральной инъекции антител. Наибольший интерес в
этом отношении представляют попытки лечения рака. Однако при введении
больному МКА грызунов в его организме в ответ на чужеродный белок начнут
вырабатываться антитела, что может не только свести на нет
терапевтический эффект, но и привести к опасным клиническим осложнениям.
Проблема усугубляется еще и тем, что из-за резистентности опухолевых
клеток к действию иммунных механизмов [1] больному необходимы
неоднократные и притом большие дозы антител.
154
Глава 4
1.2. Ограничения, затрудняющие производство моноклональных антител
человека
Несмотря на то что потребность в МКА человека совершенно очевидна, в
настоящее время известно удивительно мало сообщений об их успешном
получении. Причина этому - пока еще не решенные проблемы гибридомной
технологии клеток человека. Эти проблемы заслуживают детального
рассмотрения, поскольку в них отражаются принципиальные различия
стратегий получения МКА человека и грызунов.
Первое, что обращает на себя внимание, - это ограничения в использовании
иммунизации. На человеке недопустимо применять те схемы иммунизации,
которые у грызунов вызывают максимально интенсивный иммунный ответ. Для
получения клеток-предшественников нужной специфичности в большинстве
случаев приходится рассчитывать на случайную иммунизацию. Однако это
ограничение, по крайней мере в качественном аспекте, оказывается не таким
уж строгим, как это может показаться на первый взгляд. Дело в том, что
иммунный ответ на многие антигены, к которым требуется получить МКА,
возникает естественным образом. Например, при беременности организм
матери вырабатывает антитела к отцовским антигенам, плода, которые
используются для типирования и определения групп крови. Можно найти
иммунные В-клетки и у больного' раком, если в его крови циркулируют
противоопухолевые антитела. Аналогичным образом иммунный ответ возникает
в результате вирусных и бактериальных инфекций. И в этом случае можно
получать иммунные клетки. Наконец, можно рассчитывать на весь спектр
специфичностей нормальных антител индивидуума, включая и аутоантитела.
Получение МКА человека, специфичных к собственным антигенам, намного
упростило бы изучение патогенеза аутоиммунных заболеваний.
Второе весьма существенное различие между технологиями получения МКА
человека и мыши касается источника клеток, синтезирующих иммуноглобулины.
Единственный практически' доступный источник В-клеток человека - это
периферическая кровь. Иногда можно использовать клетки лимфатических
узлов, удаленных у больных раком. Периферическая кровь, как известно,
очень бедна плазматическими клетками, следовательно, для получения
предшественников клеток, образующих антитела, необходимо разработать
новые подходы.
Успешному получению МКА человека препятствует и то обстоятельство, что в
распоряжении экспериментатора имеется очень мало перевиваемых in vitro
линий миелом человека, пригодных в качестве партнеров для слияния. Однако
эта проблема решается различными путями. Одни исследователи по-
Моноклональные антитела человека
155
стоянно ведут поиск новых миелом человека, другие используют для
гибридизации обычные мышиные миеломы, добиваясь при этом заметных
успехов. Кроме того, иногда довольно успешно используются так называемые
гетеромиеломы, полученные путем слияния миеломных клеток мыши и человека,
обеспечивающие одновременно и стабильность фенотипа, и высокую
интенсивность синтеза антител.
Многие из проблем, которые возникают при соматической гибридизации клеток
человека, успешно решаются, однако, другим путем. Дело в том, что с
помощью вируса Эпштейна - Барр (ВЭБ) можно трансформировать и
иммортализовать В-лимфоциты человека (но не мыши), не прибегая к слиянию
с клетками миеломы [2, 3]. Применение ВЭБ-трансформации для создания
линий-продуцентов представляет собой самое существенное отличие получения
МКА человека по сравнению с МКА мыши. Данный метод будет подробно описан
ниже.
2. Необходимое обеспечение (дополнение к списку, который приведен в
гл. 3,
посвященной получению моноклональных антител мыши)
2.1. Вирус Эпштейна-Барр
Существуют различные источники ВЭБ, но'наиболее широко используют линию
