Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 16

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 122 >> Следующая

Кроме того, от мыши можно получить лишь несколько миллилитров крови, и
взятие такого количества сопровождается гибелью животного.
42
Глава 2
2.3.3. Овцы
Овец рекомендуют для получения больших количеств ан-тисыворотки (свыше 5
л). Антитела овцы, так же как и кролика, обладают хорошими
преципитирующими свойствами. При использовании ПАФ главным образом
образуется IgGi, который стабилен, хорошо хранится, легко поддается
очистке и практически не обладает подвижностью в агаровом геле при pH
8,6, что важно для ракетного и двумерного иммуноэлектрофореза. В
пересчете на объем получаемой антисыворотки овцы дешевле других животных.
Их легко иммунизировать; используя плазмозаменители и восстанавливая
клеточный состав крови, можно не прибегать к забою животного. Молодых
животных иммунизируют в первую же весну и лето и забирают кровь осенью и
зимой без нарушения их репродуктивной активности.
Овцы, как и кролики, дают хорошие титры антител к Ig человека всех
классов. От овец получены преципитирующие антисыворотки, специфичные к
подклассам IgG человека, что, по-видимому, свидетельствует о способности
этих животных распознавать тонкие структурные различия иммуноглобулинов
других млекопитающих. Обычно от овцы и кролика получают одинаково хорошую
антисыворотку к изотипам иммуноглобулинов крыс и мышей, а кроме того, как
от филогенетически отдаленных видов, и к иммуноглобулинам друг друга.
Например, в методах с использованием первых антител кроличьего
происхождения вторыми антителами могут быть иммуноглобулины овцы к
иммуноглобулину кролика, и наоборот. Очищенные с помощью аффинной
хроматографии кроличьи и овечьи антитела стабильны при хранении. В
дополнение ко всему вышесказанному Fab- и F( ab)2-фрагменты могут быть
получены из овечьих и кроличьих антител по хорошо описанной и легко
воспроизводимой методике [11].
2.4. Рекомендации по использованию животных
2.4.1. Численность
При иммунизации всегда следует использовать несколько животных и
контролировать иммунный ответ у каждого животного по отдельности. При
этом принимают во внимание различия между животными и затем либо получают
пул антисывороток, либо отбирают те из них, которые обладают максимальной
авидностью/аффинностью.
Получение поликлональных антител и контроль их качества
43
2.4.2. Состояние животных
Никогда не следует использовать животных в плохом физическом состоянии
или находящихся в состоянии стресса. В случае применения лабораторных
животных следует убедиться в, том, что данная группа содержалась в
хороших условиях и достаточно спокойной обстановке.
2.4.3. Возраст и гол
Стараются использовать молодых взрослых животных. Идеально подходят мыши
и крысы в возрасте 3-4 мес и кролики в возрасте 4-6 мес. Характерных
различий в гуморальном ответе в зависимости от пола не наблюдается.
Никогда не следует иммунизировать беременных животных, если это не
предусмотрено целью специально разрешенного эксперимента.
2.4.4. Юридическая ответственность
Инструкции Министерства внутренних дел Великобритании требуют, чтобы все
процедуры, связанные с иммунизацией и последующим взятием крови,
проводились при наличии персонального разрешения и утвержденного
специального разрешения на предстоящие работы. Каждый исследователь несет
личную ответственность за благополучие животных. Необходимо вести
соответствующую запись всех процедур. Иммунизацию, анестезию, взятие
крови и забой выполняют аккуратно, с целью снизить до минимума боль и
стресс. Использование овец тоже требует специального разрешения. Без
соответствующего разрешения нельзя проводить никаких работ,
предусматривающих получение антисывороток и моноклональных антител.
Лицензии необходимы для того, чтобы доказать наличие соответствующего
опыта в работе с животными. Аналогичные строгие инструкции по
использованию животных для получения антител существуют во всех странах,
входящих в Европейское экономическое сообщество, и в США.
3. Приготовление иммуногена
3.1. Иммуногены, получаемые путем конъюгации гаптена
с белком
Для получения антител к веществам с низкой мол. массой необходима их
коньюгация с носителем, обычно белком. Использование сложного белкового
носителя имеет то преимущество, что он, как и тимус-зависимый антиген,
вызывает актц-
44
Глава 2
вацию и пролиферацию Т-хелперов, которые способствуют формированию ответа
на гаптен. Для получения эффективного ответа желательно, чтобы на каждые
100 кДа носителя приходилось 10-30 молекул гаптена.
Некоторые гаптены способны спонтанно соединяться с аминогруппам,и белков
и благодаря легкости синтеза и простоте строения занимают особое место в
изучении клеточных основ, кинетики и специфичности гуморального ответа.
Примерами таких гаптенов служат динитрофенил (ДНФ) и тринитрсфе-нил
(ТНФ). В качестве носителей обычно используют гетеро-логичные у-
глобулины, альбумины и тиреоглобулины, а также гемонианины моллюска
фиссуреллы и краба Maia squlnado.
Если небольшие молекулы не могут спонтанно соединяться с носителем,
Предыдущая << 1 .. 10 11 12 13 14 15 < 16 > 17 18 19 20 21 22 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed