Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кэтти Д. -> "Антитела. Методы. Книга 1" -> 15

Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.

Кэтти Д., Райкундалия Ч., Браун Дж., Линг Н.Р. Антитела. Методы. Книга 1 — М.: Мир, 1991. — 287 c.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка): metodikn11991.djvu
Предыдущая << 1 .. 9 10 11 12 13 14 < 15 > 16 17 18 19 20 21 .. 122 >> Следующая

с взвесью убитых клеток В. pertussis, основными активными компонентами
которой служат липополи-сахарид (ЛПС) и коклюшный токсин. Известно, что
токсин усиливает образование как IgG, так и IgE [6]. Суспензию убитых
клеток В. pertussis можно приобрести коммерческим путем (см. приложение).
2.2.5. Липосомы
Можно приготовить искусственные липосомы из лецитина, холестерина и
стериламина [7]. Включение в их состав дифтерийного анатоксина приводит к
усилению гуморального от-
40
Глава 2
вета. Иммуноген, заключенный в липосомах, после внутривенного введения
быстро локализуется в селезенке, а после внутримышечного, подкожного и
внутрикожного введения длительно высвобождается из депо. В первом случае
действие адъюванта может быть связано с эффективным представлением
встроенного в мембрану липосом антигена антиген-чувстви-тельным клеткам.
Активность адъюванта можно увеличить введением в его состав ЛПС, липида А
или мурамилдипептида (разд. 2.2.6). Один из важных практических аспектов
использования липосом - это возможность применять для иммунизации
высокотоксичные вещества, например змеиные яды. Так, внутривенные и
подкожные инъекции мышам, кроликам или овцам токсичных при ином способе
иммунизации доз яда гадюки приводили к формированию длительного и
выраженного гуморального ответа [8, 9].
2.2.6. Мурамилдипептид
Активный компонент микобактерий со свойствами адъюванта был
идентифицирован как трипептид-моносахарид, наименьшая активная часть
которого определена как мурамилдипептид (МДП) [10]. В настоящее время он
поступает в продажу в виде коммерческого препарата (см. приложение) и
может быть использован вместо убитых нагреванием микобактерий для
приготовления ПАФ. Мурамилдипептид представляет собой и активный адъювант
при введении совместно с иммуногеном в физиологическом растворе; при этом
у мышей образуется исключительно IgGi. Мурамилдипептид способствует
выработке антител к синтетическим антигенам.
2.3. Выбор животного
2.3.1. Мыши и крысы
Большая часть наших представлений о природе иммунного ответа получена в
исследованиях, проведенных с помощью мышей и крыс. Эти животные подходят
для интенсивного использования в лаборатории, доступны в виде инбредных
линий, представляющих интерес для иммунологов, а также сходным образом
отвечают на любой антиген, благодаря чему могут служить надежным
источником антител. Не менее важно другое обстоятельство: в ходе
инбридинга аллельные различия полиморфных молекул фиксируются в генотипе
данной линии, что создает уникальную возможность для изучения аллельных
систем, таких как комплекс генов гистосовместимости, аллотипы и
изоэнзимы. Межлинейная перекрестная имму-
Получение поликлональных антител и контроль их качества
41
низация дает аллельспецифические антитела. Кроме того, мыши и крысы
представляют собой единственные виды лабораторных животных, клетки
которых могут быть использованы для получения гибридом, секретирующих
моноклональные антитела. Таким образом, мыши и крысы занимают особое
место среди животных, используемых для производства антител. У инбредных
мышей и крыс существуют межлинейные различия в иммунном ответе на
молекулы с низкой иммуногенностью, поэтому выбор той или иной линии может
иметь очень большое значение.
2.3.2. Кролики
Для получения поликлональных антисывороток, используемых в повседневных
иммунологических методах исследования, особенно в реакциях преципитации,
применяют более крупных животных, в частности лабораторных кроликов.
Кроликов можно содержать в клетках, они хорошо размножаются в неволе,
выносливы и долго живут. Уход, иммунизация и взятие крови у этих животных
не представляют труда. Полученные от кроликов антисыворотки обладают
хорошими преципитиру-ющими свойствами и стабильны при хранении,
иммуноглобулиновая фракция легко поддается очистке. Кроме того, такие
антисыворотки, обладая высокой авидностью/аффинностью* пригодны для
использования в чувствительных иммунологических тестах. В течение
нескольких месяцев в период максимального ответа можно получить не менее
100 мл антисыворотки и еще 150 мл при аутопсии. Аутбредные кролики
отвечают на иммуноген по-разному, поэтому следует использовать для
иммунизации несколько животных, протитровать их сыворотки по отдельности,
затем смешать отобранные пробы, если требуется максимальное разнообразие
антител. Кролики достаточно хорошо отвечают на широкий спектр иммуногенов
в сочетании с адъювантом Фрейнда образованием IgG.
В некоторых случаях, например при хронической внутривенной иммунизации
суспензией убитых пневмококков, у кроликов может вырабатываться
специфический IgG к полисахариду в количестве более 50 мг/мл. Обычно же
высоким титром считается 1-2 мг/мл антител, образующихся в ответ на
введение белкового антигена. Это гораздо больше, чем у мышей, к тому же
период полужизни IgG мыши составляет лишь 1-2 дня, он гораздо менее
стабилен, особенно в очищенной форме, и слабо преципитирует антигены.
Предыдущая << 1 .. 9 10 11 12 13 14 < 15 > 16 17 18 19 20 21 .. 122 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed