Антитела. Методы. Книга 1 - Кэтти Д.
ISBN 5-03-002363-1
Скачать (прямая ссылка):
реагента.
8.4. Технические замечания
1. Конечную стадию получения картины осаждения клеток для определения
степени гемолиза можно /ускорить путем осторожного /центрифугирования
панелей.
2. В контрольных лунках, содержащих дольКо антиген пли только антитела,
должен наблюдаться полный гемолиз, поскольку в них не происходит
связывания комплемента. Отсутствие лизиса .в обоих контролях
свидетельствует о неадекватном связывании анТител с индикаторными
клетками. Отсутствие (гемолиза только в одном контроле .свидетельствует о
наличии антикомплементарной активности добавленного реагента, который в
таком случае следует .заменить.
3. Поскольку IgM обладают высокой гемолитической активностью, их
выявление с помощью Данного .метода предпочтительнее по сравнению с
антителами других изотипов. .Поэтому РСК широко используются в клинике
для диагностики
Гемагглютинация и реакции антителозависимого гемолиза
269
недавно приобретенных бактериальных и вирусных инфек-дий.
4. Наиболее точный метод количественной оценки результатов заключается
в использовании нагруженных антителами клеток, меченных 51Сг. 50%-ную
суспензию клеток метят в течение 30 мин при 22 °С, трижды отмывают в БГР
и разводят до 0,5%-ной .суспензии. Реакцию проводят, как оШисано в (разд.
8.3.1 и /8.3.2, ыэ после инкуба'ции с индикаторными (клетками 'панель
охлаждают до 4 °С и центрифугируют при 2000g в течение 5 мин. Из каждой
лунки отбирают супернатант (75 мкл) для подсчета радиоактивности в гамма-
счетчике. Альтернативный подход - это спектрофотометричеокое измерение
поглощения гемоглобина в супернатантах (после центрифугирования) при 413
н<м. В обоих случаях связывание комплемента сравнивают с контрольным
100%-ным лизисом, а результаты выражают как .процент связывания
комплемента. Конечную точку можно определить как максимальный титр
антител или максимальное разведение айтигена, дающие более 50% связывания
комплемента [27].
Литература
1. Атап А. /., Borg D., Kondo О. L., Wara D. W. J. Immunol. Methods,
17, 365 (1977).
2 Chao W., Yokoyam М. T. Clin. Chim Acta, 78, 79 (1977).
3. Singer J. M" Plotz С. M. Am. J. Med., 21, 888 (1956).
4. Winblad S. Acta Pathol. Microbiol. Scand., 49, 500 (1960).
5 Gleeson-White М. H., Heard D. H., Mynors L. S., Coombs R. R. A. Br. J.
Exp. Pathol., 31, 321 (1950).
6. Ling N. R. Immunology, 4, 49 (1961).
7. Stephen V., Boyden S. V. J. Exp. Med., 93, 107 (1951).
8. Stavitsky A. B. J. Immunol., 72, 368 (1954).
9. Gyenes L., Sehon A. H. Immunochemistry, 1, 43 (1964).
10. Onkelinx E., Mendelmans W., Ionian М., Loutie R. Immunology, 16, 35
(1969).
11. Avramaeus S., Tan Don B., Chinlon S. Immunochemistry, 6, 67 (1969).
12. Ling N. R. Br. J. Haematol., 7, 299 (1961).
13 Hirata A. A., Emirick A. I., Boley W. F. Proc. Soc. Exp. Biol. Med.,
143, 761 (1973).
14. Sanderson C. }., Wilson D. V. Immunochemistry, 8, 163 (1971).
15. Jandl J. H" Simmons R. L. Br. J. Haematol., 3, 19 (1957).
16. Gold E. R.. Fudenberg H. H. J. Immunol., 99, 859 (1967).
17. Ling N. R., Stephens G., Bratt P., Dhaliwal H. S. Mol. Immunol., 16,
637
(1979).
18. Ling N. R., Bishop S., Jefferis R. J. Immunol. Methods, 15, 279
(1977).
19. Bankert R. B., Mayers G. L., Pressman D. J. Immunol.,
118, 1265 (1977).
20. Ghanta V. K-, Hamlin N. М., Pretlow T. G., Hiramoto R.
N. J. Immunol.,
109, 810 (1972).
21. Hammerling U" Westphal O. Eur. J. Biochem., 1, 1 (1967).
22 Bankert R. B., Mayers G. L" Pressman D. J. Immunol.,
123, 2466 (1979).
23. Bankert R. B" Wolf B. J. Immunol., 112, 1782 (1974).
Глава 7
24. Ling N. R., Lowe J., Hardie D., Evans S., Jefferis R. Clin. Exp.
Imrfiunol., 52, 234 (1983).
25. Parish C. R., O'Neill N., McKenzie I. F. C. J. Immunol. Methods, 39,
223
(1980).
26. Mandy W. J., Todd C. W. Immunochemistry, 6, 811 (1969).
27. Brown D., Hobart M. J. In: Techniques in Clinical Immunology,
Thompson R. A. (ed.), Blackwell Scientific Publications, Oxford, 2nd
edition, Chapter 4, p. 80, 1981.
ПРИЛОЖЕНИЕ
Список фирм, поставляющих оборудование и материалы
Оборудование и расходные материалы
Bench centrifuge (with plate carries): С. 411 model with carries
11.17.41.68 - S.A. Jouan, 130 Western Road, Tring, Herts HP23 4BU, UK
CO2 incubator: Flow Laboratories, Woodcock Hill, Harefield Road,
Rickmansworth, Herts WD3 IPQ, UK Cork borers: Gallenkamp Co. Ltd,
Technico House, Christopher Street, London EC2P 2ER, UK Dialysis tubing:
Medicell International Ltd, 239 Liverpool Road, London N1, UK
Diluting tulips: Flow Laboratories, Woodcock Hill, Harefield Road,
Rickmansworth, Herts WD3, IPQ, UK.
Electrophoresis box with large buffer reservoirs: Chemical Laboratory
(Chemlab) Instruments Ltd, 129 Upminster Road, Hornchurch, Essex RM11
3XJ, UK Electrophoresis units: Paines and Byrne Ltd, Pabyrn Laboratories,
177/179 Bilton Road, Perivale, Greenford, Middlesex UB6 7HG, UK
Film developer and fixer: Kodak D19, Eastman-Kodak Co., PO Box 10,
Dallimore Road, Manchester M23 9NJ, UK Gelbond(tm) film: Marine Colloids