Жизнь микробов в экстремальных условиях - Кашнер Д.
Скачать (прямая ссылка):
His 10 8 9 7 6 7 6 5 11
Arfi 10 17 16 13 12 11 12 9 10
Asx 34 31 39 40 45 37 30 32 38
Thr 22 23 19 24 28 23 19 20 22
Ser 13 12 18 14 14 24 35 25 19
Glx 23 26 28 27 22 22 23 24 18
Pro 12 6 11 10 9 13 15 12 12
Gly 25 37 25 32 31 29 44 30 32
Ala 42 39 40 36 35 33 33 32 32
Cys 1 1 2 2 4 2 2 5 4
Val 30 30 40 32 32 36 25 38 34
Met 7 5 5 7 8 6 4 10 9
lie 22 18 19 21 17 19 15 18 21
Leu 31 33 27 21 20 22 19 18 18
Tyr 10 9 7 7 8 10 8 9 9
Phe 7 7 5 12 11 10 12 15 14
Trp 3 uc 3 HC 4 3 2 3 3
Общее количе 332й 321 337 330 332 334 331 333 332
ство
pi' 4,8 He 4,3--- Око He Око 8,3 Око Око
---4,6 ло 5 ло 5 ло 7 ло 7
1 Сокращения и источники данных: Т. а. — Thermus aquaticus (Hocking, Harris, 1976); T. I'.—Thermus thermophilus (Fujita et al., 1976); B. s.—Barillas stearothermophilus (Singleton et al., 1969); B. c. — Bacillus ccreus (Suzuki, Imahori, 1973a); E. c.— Escherichia cali (D'Alessio, Josse, 1971); Y. — дрожжи (Jones, Harris, 1972); E. g. — Euglena gracilis (Grissom, I<ahn, .1975); L. m. — мышцы кальмара (Davidson et al., 1967); P. m. — мышцы сниньи (Harris, Perham, 1968); 11С — нет сведений; pi — нзоэлектрическая точка.
" На основе данных об аминокислотной последовательности.
3 Первоначальные сведения об аминокислотном составе с поправкой на молекулярный вес субъединицы, равный 36 ООО; в действительности, как показывают данные об аминокислотной последовательности, число остатков равно 333 (Harris, неопубликованные данные).
4 NAD+-зависимый фермент.
s Два аминокислотных остатка в последовательности не идентифицированы (в положе-ниях 303 и 304)._______________________________________________________________________ ¦
и общем количестве аминокислотных остатков. Если говорить о тенденциях, то у всех трех термофильных глицеральдегид-3-фос-фат —дегидрогеназ, по-видимому, повышено содержание лейцина и в меньшей степени аргинина. Увеличение содержания лейцина сопровождается другими изменениями, так что по общей гидрофобности термофильный фермент не отличается от его аналогов из мезофильных источников (Singleton, Amelunxen, 1973). Хотя общая гидрофобность фермента, по-видимому, не увеличивается, было показано (Suzuki, Imahori, 1973 b), что некоторые гидрофобные участки более стабильны, чем остальные. Исходя из спектров флуоресценции и данных титрования было найдено, что у термофильного фермента многие остатки тирозина, скрытые в глубине молекулы, имеют более высокую величину рК (11,8), а остатки триптофана окружены, по-видимому, более гидрофобными участками, чем у фермента из мышц кролика.
Поскольку ГФДГ из Т. aquciiicus содержит только один остаток цистеина на субъединицу белка в отличие от аналогичных ферментов из мышц омара и свиньи, содержащих соответственно пять и четыре остатка цистеина, Хокинг и Харрис (Hocking, Harris, 1976) высказали предположение, что термостабильность ферментов связана с наличием в них лишь небольших количеств цистеина (см. разд. 6ЛП, В). Возможно, что низкое содержание цистеина обусловливает относительно более высокую термостабильность ферментов из Т. aquaticus и Т. thermophilus по сравнению с ферментом из В. stearothermophilus (два остатка цистеина на одну субъединицу), но все же это объяснение термостабильности, присущей термофильным ферментам, кажется маловероятным, так как сходные ферменты из В. cereus, дрожжей и Е. gracilis также содержат по два остатка цистеина на одну субъединицу белка (см. табл. 6.4). Однако, как отметили Хокинг и Харрис (Hocking, Harris, 1976), окислению должны подвергаться только те остатки цистеина, которые расположены на поверхности молекулы. Это может быть причиной пониженной термостабильности ГФДГ мезофилов, как, например, фермента из мышц кролика, содержащего 16 сульфгидрильных групп па один тетрамер, причем восемь из них быстро реагируют с/г-оксимерку-рибензоатом (ПОМБ) (Murdock, Коерре, 1964). В случае ГФДГ В. stearothermophilus из восьми сульфгидрильных групп, содержащихся в нативном ферменте, лишь часть их реагирует с ПОМБ (от двух до трех групп на один тетрамер) или с реактивом Элмена 1 (четыре группы на один тетрамер). Однако в отличие от фермента из мышц фермент из В. stearothermophilus, не подвергается необратимой инактивации в реакции с ПОМБ, так как его активность может быть полностью восстановлена при
