Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кашнер Д. -> "Жизнь микробов в экстремальных условиях" -> 145

Жизнь микробов в экстремальных условиях - Кашнер Д.

Кашнер Д. Жизнь микробов в экстремальных условиях — М.: Мир, 1981. — 521 c.
Скачать (прямая ссылка): jiznmikrobovvextrimusloviyah1981.djvu
Предыдущая << 1 .. 139 140 141 142 143 144 < 145 > 146 147 148 149 150 151 .. 267 >> Следующая

Что касается структурных свойств ГФДГ из В. stearothermophilus, есть данные о том, что фермент диссоциирует под действием 8 М мочевины и 5 М солянокислого гуанидина (Amelunxen et al., 1970). Как и в случае нетермофильных глицеральде-гид-3-фосфат—дегидрогеназ, диссоциация данного фермента в присутствии последнего денатурирующего агента протекает сразу и необратимо. Хокинг и Харрис (Hocking, Harris, 1976) сообщили о том, что фермент из Т. aquaticus необратимо денатурируется в 6 М солянокислом гуанидине. Возможно, это связано с низким содержанием SIi-групп в данном ферменте. Однако в отличие от быстрой и необратимой диссоциации фермента из мышц кролика в 8 М мочевине диссоциация фермента из В. stearothermophilus представляет собой реакцию первого порядка. В использованных экспериментальных условиях фермент обнаруживал удивительную устойчивость к денатурации при 30, 40 и 50°С. Тем не менее при температурах, характерных для термофилов (55 и 60°С), инактивация протекала очень быстро. Если в конце инкубационного периода в опытную смесь добавляли цистеин, то при всех температурах наблюдалась реактивация фермента, хотя она и колебалась от 50% при 30°С до приблизительно 20% при 60°С; в присутствии цистеина фермент проявлял активность также и в 8М мочевине. Следует отметить, что после исчерпывающего диализа в 8 М мочевине происходит диссоциация фермента, о чем свидетельствуют результаты опытов по определению скорости седиментации (неопубликованные данные). Значительная устойчивость к действию мочевины и ДСН была также отмечена для ферментов из Т. aquaticus (Hocking, Harris, 1973) и Т. ther-mophilus (Fujita et al., 1976).
Как видно из табл. 6.3, в присутствии 8 М мочевины или 5 М
Таблица 6.3
Параметры оптического вращения глицеральдегид-3-фосфат — дегидрогеназы из Bacillus stearothermophilus
Растворитель1 ---а» ---/>0
НоО, pH 6; 25 или 30°С 129±14 134 dtl 1
Н"20, pH 6; 55°С 119±6 135 dh8
Н20, pH 6; 60°С 176±10 206±14
Н20, pH 6; 300 128±10 211=Ы5
Буфер, 30°С3 148±6 119=Ь9
7,8---8,3 М мочевина, 25 или 30°С4 526±19 66=Ь11
8,3 М мочевица в Н20, 60°С 462±17 68±8
5,1 М гуанидин-HCl в буфере, 30°С 589±18 64- ±8
5,1 М гуанидиц-HCl в буфере, 60°С 540±20 66±9
1 За исключением отмеченных случаев растворы содержали приблизительно 0,04 М (NH4)2so4.
- После нагревания при 60°С в течение 16 ч.
3 Во всех случаях в качестве буфера использовали 0,01 М пмидазол — 0,001 М ЭДТА, pH 7,4.
* В Н20, pH 6,0 или в буфере (0,01 М пмидазол — 0,001 М ЭДТА, pH 7,4).
солянокислого гуанидина наблюдается значительное развертывание молекулы фермента из В. stearothermophilus. Степень развертывания молекул, рассчитанная на основе величин (щ') я, при 300 и 400 нм, близка к величине для беспорядочного клубка. Хотя при 70°С фермент еще сохраняет каталитическую активность, при 60°С в нем происходит определенное конформанионное изменение (табл. 6.3). Нагревание фермента в воде при температурах от 30 до 55°С не приводит к существенным изменениям параметров а0 и Ь0. Однако нагревание при 60°С изменяет величину а0 от —129 до —176, а величину Ь0 от —134 до —206. Сузуки и Имахори (Suzuki, Imahori, 1973b), измерив спектры КД, подтвердили эти данные и показали, что при 65°С в ферменте происходят еще большие изменения. Таким образом, молекула фермента отнюдь не является жесткой, а некоторые ее участки могут развертываться, не нарушая каталитического центра. Все это вместе с неопубликованными наблюдениями о том, что данный белок может быть подвергнут значительному расщеплению трипсином с минимальной потерей активности, свидетельствует о возможной связи термостабильности с определенной группой устойчивых к денатурации аминокислотных остатков, расположенных вокруг активного центра фермента. Вторичная структура ГФДГ термофилов, по-видимому, сходна со структурой такого же фермента, обнаруженного у мезофилов. На основании спекгрополяриметрических измерений Сузуки и Имахори (Suzuki, Imahori, ИШЬ) пришли к заключению, что фермент из
В. siearothermophilus имеет большое структурное сходство с ферментом нз мышц кролика. В другой работе (Fontana et al., 1976), в которой проводилось исследование термальных свойств ГФДГ из Е, coli, был сделан вывод о том, что высокое содержание участков с {3-структурой является общим свойством глицеральдегид-3-фосфат — дегидрогеназ, выделенных из ряда источников.
В табл. 6.4 приведено сравнение аминокислотного состава глнцсральдегид-З-фосфат — дегидрогеназ широкого филогенетического спектра. В общем между ферментами, полученными из всех этих источников, наблюдается заметное сходство в составе
Таблица 6.4
Аминокислотный состав одной субъединицы глицеральдегид-3-фосфат — дегидрогеназ из девяти микроорганизмов1
Аминокислота T. a.2 T. t. B. s.3 B. c. E. c. Y.2 E. g.* L. m.2 P. m.2
Lys 22 19 24 25 26 26 26 28 26
Предыдущая << 1 .. 139 140 141 142 143 144 < 145 > 146 147 148 149 150 151 .. 267 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed