Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Кантон Ч. -> "Биофизическая химия. Том 2" -> 121

Биофизическая химия. Том 2 - Кантон Ч.

Кантон Ч., Шиммер П. Биофизическая химия. Том 2 — М.: Мир, 1984. — 496 c.
Скачать (прямая ссылка): biofizicheskayahimiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 242 >> Следующая

Б).
Точность седиментационных измерений позволяет проводить с их помощью
довольно тонкие опыты по распознаванию структурных отличий. Измерение
коэффициента седиментации гемоглобина дает величину - 4,45 S.
Индивидуальный коэффициент седиментации каждой из четырех его субъединиц
(две а и две /3) равен примерно 1,77 ± 0,055 S. С помощью теории Кирквуда
- Райзмана (разд. 10.2) можно, оценить коэффициент седиментации
тетрамера, зная свойства мономера. Если у тетрамера (t) и мономера (т)
одно и то
УЛЬТРАЦЕНТРИФУГИРОВАНИЕ
241
5
О
2 4 6 8 0
/#'(см-10*)
2 4 6 8
1^3( см-10-")
/1
?
РИС. 1V. 10. Зависимость коэффициента седиментации частиц вируса
стеблевой пятнистости табака (ВСП) от длины. Длину вируса (Г) определяли
с помощью электронного микроскопа и полученные размеры использовали при
расчете///сф для случая вытянутых эллипсоидов вращения. На приведенных
здесь графиках показана фактическая зависимость определенной опытным
путем длины в степени 2/3 от произведения экспериментального значения у
на расчетную величину///сф. А. Отношение осей для эллипсоида вычисляли
как I/d, где d - диаметр стержня. Б. Отношение вычисляли как V2/3//d.
[Harrison, Klug, Virology, 30, 738 (1966).]
же значение У2, то можно записать согласно уравнению (11.28):
где /т//( можно рассчитать по уравнению (10.34); при расчете должна
учитываться конкретная геометрическая модель тетрамера. Взяв
экспериментальное значение коэффициента седиментации мономера и используя
значения ///т, приведенные на рис. 10.12, мы можем предсказать, что s =
3,91 ± 0,11 S для линейного тетрамера, s = 4,18 ± 0.12S для плоского
"квадратного" тетрамера и s = 4,43 ± 0,13 S для тетраэдрического
тетрамера. Точность данных, как можно видеть, достаточна для того, чтобы
позволить нам сделать правильный вывод о том, что гемоглобин имеет
тетраэдрическое расположение субъединиц. На рис. 11.11 представлены
результаты применения теории Кирквуда - Райзмана в более сложном случае.
В тех случаях, когда седиментацию применяют для регистрации
хонформационных изменений, возникает потребность проводить как можно
более точные измерения различий в седиментации двух образцов одного и
того же вещества, находящегося в слегка различных условиях. Эффективным
методом, разработанным для этой цели, является разностная седиментация1*.
Ячейка при этом содержит две одинаковые расположенные рядом полости
секториальной формы для центрифугируемого раствора (двухсекторный вкладыш
на рис. 11.3, Б). Каждый из сравниваемых образцов помещают в отдельный
сектор и центрифугируют их вместе. Оптические системы устроены так, чтобы
улавливать только различия между этими двумя секторами, почти так же, как
это делается при разностной спектроскопии. Особенно удобно оказалось
использовать для этой цели опти-
11 Не путайте с дифференциальным центрифугированием - препаративным
методом разделения тяжелых и легких фракций. - Прим. ред.
V*m = = 4/п/Л
(11.40)
16-84
ГЛАВА 11
Модель
0
Число единиц
s (теоретическая) 20 S
59 S
10
100 S
15
131 S
20 156 S
(экспериментальная) (Loligo)
19 S
59 S
97 S
s (экспериментальная) (Busycon )
60 S
100 S
130 S
155 S
РИС. 11.11. Найденные опытным путем и расчетные значения коэффициентов
седиментации для двух видов гемоцианинов моллюсков (Loligo и Busycon).
При расчете теоретических величин для олигомерных моделей, показанных иа
рисунке, пользовались теорией Кирквуда-Райзмана. [Bloomfield et al.,
Biopolymers, 5, 135 (1967).]
ческую систему Рэлея, которая регистрирует разность концентраций
растворенного вещества в этих двух секторах как функцию радиального
расстояния. Этот метод позволяет измерять такие малые различия в
значениях коэффициентов седиментации, как 0,01 S, с точностью,
превышающей 1%. Однако в данном случае к оптической системе предъявляются
очень жесткие требования, что не позволяет использовать метод для
рутинных измерений.
ЗАВИСИМОСТЬ СКОРОСТИ СЕДИМЕНТАЦИИ ОТ КОНЦЕНТРАЦИИ
Все, что мы говорили до сих пор, относится к двухкомпонентной системе
(вода плюс макромолекулы) в предельном случае сильного разбавления. Если
эти условия не выполняются, могут возникнуть значительные трудности.
Здесь мы кратко рассмотрим некоторые наиболее часто встречающиеся
эффекты.
Даже в двухкомпонентной системе скорость седиментации зависит от
концентрации растворенного вещества. Зависимость коэффициента
седиментации от концентрации в случае, когда в системе присутствует один
молекулярный компонент, можно описать формулами вида
s = s°(l + к'с)1 (11.41)
ИЛИ
s = s°(l - к"с) (11.42)
где 5° - величина, соответствующая бесконечному разбавлению, а Ат' и Ат'
- эмпирически подбираемые константы. Оба уравнения объясняют уменьшение
наблюдаемой скорости седиментации с увеличением концентрации (рис.
11.12). При малых значениях с оба
уравнения эквивалентны, так как (1 + Arc)-1 = 1 - Arc + (члены
высших порядков по с).
Однако эти выражения предсказывают весьма различное поведение при высоких
Предыдущая << 1 .. 115 116 117 118 119 120 < 121 > 122 123 124 125 126 127 .. 242 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed