Клетки в морфогенезе - Исаева В.В.
ISBN 5-02-005760-6
Скачать (прямая ссылка):
Общая морфология спикулогенных клеток и синцитиев (развитие эндоплазматической сети с рибосомами, аппарата Гольджи и продуцируемых нм секреторных пузырьков) подобна морфологии типичных секреторных клеток. Можно представить следующую последовательность ведущих к минерализации процессов: синтез необходимых для связывания, переноса и преципитации кальция белков на рибосомах эндоплазматической сети, перемещение белков в аппарат Гольджи, гликолизиро-вание их, транспорт в мембранной ’’упаковке” связанного гликопротеидами кальция и кристаллизация кальцита на органическом матриксе внутри крупной вакуоли. У эмбрионов ежа найдены белки (или глико-протеины), специфичные для клеток первичной мезенхимы и матрикса спикул (см выше); обнаружен ассоциированный с личиночными спику-лами связывающий кальций белок (Iwata, Nakano, 1986); показано, что моноклональные антитела к одному из белков, локализованному на поверхности клеток первичной мезенхимы и в матриксе спикул, подавляют кальцификацию в культуре этих клеток (Carson et al., 1985).
Отличие спикулогенеза у иглокожих от типичной секреции (и от внеклеточной минерализации как варианта секреции) в том, что содержимое вакуолей секретируется не во внеклеточное пространство, а в огромную вакуоль внутри клетки, по существу представляющую аналог внеклеточного пространства. На самых поздних стадиях минерализации мембрана внутриклеточной вакуоли сливается с плазматической мембраной, дальнейший рост скелета идет внеклеточно. Внеклеточная минерализация осуществляется в процессе роста палочковидных спикул S. purpuratus in vitro (Decker et al., 1987); авторы полагают, что полость растущей спикулы всегда сообщается с внеклеточным пространством, за исключением самых ранних стадий спикулогенеза. Однако спикулогенез в культуре клеток эмбрионов S. nudus. по нашим данным (Керкис, Исаева, 1984), идет как внутриклеточный процесс до стадии трехлучевой закладки спикулы.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МОРФОГЕНЕТИЧЕСКОЙ ФУНКЦИИ ЦИТОСКЕЛЕТА В СПИКУЛОГЕНЕЗА IN VITRO
Поскольку морфофункциональная клеточная архитектоника зависит, как известно, от организации цитоскелета, было испытано влияние на спикулогенез in vitro ингибиторов, нарушающих структуру микрофила* ментов и микротрубочек (Исаева, Чуриков, 19886), проведено электронно-микроскопическое изучение цитоскелетных структур (совместно с А.Ю. Керкисом) и выявление фибриллярного актина родаминфаллоиди* ном в спикулогенных клетках и синцитиях.
93
???ЕЕГЯ“ ’ “ >«« сп*кул.,е,,н„я „„е1Шщи
'”,,0,”<» *"»«”•«» «ику,„„,.й соединяют^ CoCoeornIIOW "сследовании в цитоплая
синцития, найдены^ГННЫе Участки Расчлеиснног КИХ ТЯЖЗХ’
магического тяжа Распол°«еш,ые0;0 ^WCHHoro
клегок и ^оштаев не обняп филоп°Диальных отрОСТКа Jt°C” Ш,Т°ПЛа3'
ментов; иитоскелеГл РУЖСН0 ясно выраженнмГп спикулогенных
(рис. 76, 4. У ^ЛЬТИПОЛЯр1|Ьгх КЛРТШГ как У биполярных
Обработка цитоуяг, С МНожеств°м филоподий
Г" “S' —— ¦—
.движение и слияние в синцитии
Рис. 76. Окрашивание родаминфаллоидином клеток первичной мезенхимы
с — биполярная клетка (12 ч культивирования); б — мультиполярная клетка (24 ч)
4
V
Рис. 77. Флуоресценция родаминфаллоидина .срез
обработки мезенхимных синцитиев цитохалазином D (2 мкг/мл)
- Мрзенхимы н полностью ингибирует спикулогенез. клеток первичнои мезенхимы после ig_24 ч культиВирования,
Обработка ц“тоха^ ансамбли и начался спикулогенез,
когда уже образованы синщет ми„ут, исчезновение филопо-
вызывает быстрое, в течение i Пеовичной мезенхимы, коллапс
-* - «**«* rSSSSS- сш,шт,с».В
згкультурах
10-15 мин (1-5 мкл/мл) иногда наблюдалось, потерявших обычную расчлененную ф р^ у 0д ф0рМЫ (рис. 78).
некоторых случаях с небольшой С™КУ™“ ^ культур цитохалазином Длительная, в течение 2 э , р через 19-23 ч, приво-
(1-5 мкл/мл) после начала СПИКУ™Г®»^^исталлов в форме сфер или
дит к образованию множества н ппименения ингибитора спикул
многогранников. Форма возникших до Р спикулы утолщаются и
становится неправильной: концы тРех^ВуОИпо^ютсГдобавоч!,ые приобретают угловатую или округлую форму, появля ^
- .........
. ... • s --s'
*>.
Рис. 78. Амебоидная подвижность симпласта с аберрантной спикулой после воздействия цитохалазином В (1 мкг/мл, 15 мин) и последующей отмывки; интервалы между кадрами около 1 мин (Исаева, Чуриков, 19886)
m-r
V * * *
^ AV LK * 2
ч WW
гг
Юл/«м
Рис. 79. Морфология спикулогенного симпласта (о) и спикул fa, 6J после обработки ци тохалеэиком В (Исаева, Чуриков, 19886)
*
Рис. 80. Морфология спикулогенного симпласта (о) и грануловидных спикул (а, г.ослс обработки колхицином (10 мкг/мл)
б)
Р„С. 81. Форма кристаллов кальцита при неорганической минерализации
