Клетки в морфогенезе - Исаева В.В.
ISBN 5-02-005760-6
Скачать (прямая ссылка):
- Призпаков спикУлогенеза в экспериментальных
м п ^п^тг ди°слоинои культуры; сравнение спикулогенеза в организме кпнгпппип"011 Культуре позволяет приблизиться к пониманию факторов.
контролирующих цитодифференыиролку.
J
Рис. 59. Клетки первичной мезенхимы S. nudus через 4 ч после начала культивирова
ния
Рис. 60. Мультиполярная клетка первичной мезенхимы (24 ч культивирования)
/
а
г
/
I
Рис. 61. Синцитии первичной мезенхимы в однослойной культуре (24 ч) с - сетчатый ламеллярный синцитий; б - ламеллярный симпласт
Исаева В.В.
81
Рис. 62. Химерный мезенхимный симпласт (меченые ядра S. nudus, «емеченые -S.in*
tctmcdius)
Изучался спикулогенез в культуре клеток S. nudus. диссоциированных на стадии мезенхимной бластулы (т.е. до начала спикулогенеза) и куль-тивированных в морской воде с добавлением сыворотки и антибиотиков (Исаева 1980а 19816). Клетки первичной мезенхимы проявляют значительно более высокую адгезивность к искусственному твердому субст-рату (стеклу, пластику) по сравнению с эпителиальными клетками бластулы, вследствие чего мезенхимные элементы селективно накапливаются в однослойной фазе. Диссоциированные клетки бластул, лишенные ресничек и округлившиеся после процедуры диссоциации, опускаются на дно чашек Петри, оставаясь сферическими и изолированными друг от друга в течение примерно получаса. Позже из рыхлой россыпи клеток возникают их трехмерные агрегаты, соединенные друг с другом тяжами клеток. В ходе процесса агрегации большинство эпителиальных клеток постепенно открепляется от субстрата либо активно, за счех "бластуляции” (см. гл. II) и появления функционирующих ресничек, либо пассивно, теряя адгезию к субстрату.
Биполярные или мультиполярные первичномезенхимные клетки различимы на дне чашек уже через 30 мин после посева, т.е. сразу после оседания диссоциированных клеток. В течение нескольких первых часов культивирования клетки первичной мезенхимы перемещаются по дну чашек и образуют рыхлые ассоциации, состоящие из одноядерных клсто* с хорошо различимыми клеточными границами. На препаратах клеток, зафиксированных через 4 ч после начала культивирования, видно, что клетки образуют псевдоподии и вытягиваются, теряя прежнюю сферическую форму (рис. 59). Через 12 ч культивирования первичномезенхим'
ные клетки представлены биполярными, а чаще мультиполярные элементами с длинными, иногда ветвящимися филоподиями (рис. 60) и же распластанными по субстрату ламеллоподиями. Через 24 ч мезенхи^ ные клетки редко располагаются поодиночке, чаще же объединена связанные филоподиями или более широкими ’’мостиками” цитоплаз синцитиальные сети (рис. 61, а) ипи компактиые многоядерные о»
пласты с отростками (рис. 61, б), и компактные и сетчатые синиитиа ные образования, как правило, вакуолизированы; гранулы в вакуо^ вероятно, представляют собой органический матрикс минерализации-При культивировании смеси диссоциированных бластомеров эм
82
f.y
V
finnacia на пространственную организацию ансамблей Рис. 63. Влияние структуры субплас
первичной мезенхимы: квадратах с напыленным золотом; б -
нов S. nudus, меченных ", сГмГшсты, содержащие и мече-
medius возникали химерные си
ные, и немеченые ядра (рис. )• клеток первичной мезенхимы in
Помимо филоподий, типичныхд ев в однослойной культуре
vivo, для мезенхимных клею рпхн0Схи субстрата ламеллоподии,
характерны и распластанные по астаны в двумерной плоскости
сами синцитии и симпласты т
(см. рис. 61). , пячпичий адгезивности субстрата путем
При искусственном созданш P текло золрта сквозь сеточку для
напыления в вакуумной камер ие Клеток и образование ламелл
электронной микроскопии распл ^ адгезивной (золоченой) поверх-
наблюдались преимущественно на дельН0й исчерченностью поверхности (рис. 63, 4- На субстратах с пар ^ преиму1дественно вдоль
ности мезенхимные синцитии, менее сохраняли свою мульти-
бороздок поверхности субстрата, тем не ш
полярную, сетчатую морфологию (рис. , ^
Таким образом, в однослойной культуре в отличие от ситуации in vivo морфология и размеры мезенхимных синцитиев очень вариабельны; возникают гигантские синцитии, объединяющие десятки ядер, наряду с типичными для первичномезенхимных клеток in vitro филоподиями появляются ламеллоподии, мезенхимные синдатии часто оказываются распластанными по искусственному твердому субстрату, тогда как в организме эмбриона они располагаются в трехмерном пространстве, прикрепляясь филоподиями к стенкам бластоцеля, но не распластываясь по ним. Наличие наряду с филоподиями, типичными для клеток первичной мезенхимы, также ламеллоподий по периферии синцитиев и отдельных мезенхимных клеток, характерное для распластывающихся по субстра-ту в однослойной культуре клеток, отмечено для клеток первичном мезенхимы эмбрионов морского ежа (Timourian, Watchmakcr, 1975, Karp,
