Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 77

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 296 >> Следующая

исследований и разработке и исследовании фармацевтических препаратов и
продуктов питания необ-
Н+ CH3-N------С*
-----*¦ У
н2°
s н н
МТГ-
производное аминокислоты
Аминокислоты, пептиды, белки 19
N=C=S
р
S
ИТК-пептид
¦NH-C-NH-CH-C-
С)
О
О
Дифенилиндонил-'
изотйоцианат
•Пептид
NH-CH-C-NHX
И
О
-NH-C=NH + NH3X
О
О
О
Од-о-
о
-NH-C'=NH н,о C'HIl
ИТГ-производное аминокислоты
ходимы как аналитические, так и препаративные методы разделения,
поскольку d- и I.-аминокислоты отличаются не только по физико-химическим,
но и по биологическим свойствам. Раньше энантиомерные формы аминокислот
разделяли методами избирательной кристаллизации или селективного
расщепления под воздействием оксидазы аминокислот или после превращения в
соответствующие диастереоизомерные дипептиды методами газовой
хроматографии или аминокислотного анализа. В настоящее время разработаны
хиральные неподвижные, фазы для газовой и жидкостной хроматографии [59].
Предложено несколько различных способов разделения энантиомеров
аминокислот методом ВЭЖХ. Один из таких способов - конверсия аминокислот
в диастереомерные пептиды посредством реакции с N-карбоксиангидридом и
последующее разделение методом обращенно-фазовой хроматографии [59]. Он
позволяет определять оптическую чистоту большинства наиболее
распространенных аминокислот, регистрируя содержание оптического антипода
до 0,01%. Данным способом можно также разделять Thr и Не (рис. 4.16).
Другой способ ВЭЖХ-разделения энантиомеров аминокислот основан на
использовании хиральной подвижной фазы. Не-модифицированные аминокислоты
разделяют на обращенных фазах, элюируя смесями, содержащими медные
комплексы L-Pro, L-Asp-циклогексиламида [60], Ы-(га-толуолсульфонил)-L-
Phe [61], N- (n-толуолсульфонил) -D-Phe-Gly [62] или
200 Глава 4
0.5
<*(
г
0 аз
<N
X
о.
с
V
1 Q2
V *
3
О
с
и.
О
t=Z

Q1
о
О 5 Ю 15 20 25 30 35 40
t, мин
Рис. 4.16. Разделение реакционной смеси L-Thr, L-allo-Thr, D-Thr и D-
allo-Thr после реакции с L-Phe-N-карбоксиангидридом методом обращенно-
фазовой хроматографии [59].
Неподвижная фаза: нуклеосил 5 Си; элюент: 0,1 М фосфорная кислота -
двузамещенный
фосфат калия (pH 4,5)/ацетонитрил (97 : 3).
/ - L-Phe-L-Thr; 2 - L-Phe-L-allo-Thr; 3 - Phe; 4 - L-Phe-D-allo-Thr; 5 -
L-Phe-D-Thr; 6 - (L-D-гидантоиновая кислота?
Ы,Ы-ди-н-пропил-Ь-А1а [63]. В большинстве случаев элюаты подвергали до
обнаружения модификации. В работе [62] показан механизм лигандиого обмена
между двумя формами аминокислот и тозиламинокислотным комплексом меди,
связанным с неподвижной фазой. В литературе описано разделение очень
большого числа аминокислот. Примером тому может служить работа [63] (рис.
4.17).
Третий способ разделения энантиомеров аминокислот основан на
использовании хиральных неподвижных фаз, ряд которых был опубликован в
литературе. В этом методе также применяется образование комплексов с
ионами меди. Авторы работы [64, 65] описали разделение многих пар
энантиомеров на полистирольных смолах с привитым медным комплексом (Н)-
Г\1,1^-дибензилпропандиамина [64] и на обращенно-фазо-вых носителях с
привитым медным комплексом 1М-алкил-Ь-гид-роксипролина [65]. Как показал
автор работы [66], на неподвижных фазах на основе силикагеля с привитыми
ионными комплексами меди или кадмия с L-Рго-амидом можно разделить
большое число пар энантиомеров [66]. Для успешного
Аминокислоты, пептиды, белкн 201
ю 20 30 40 50 60 70
t.MHH
Рис. 4.17. Разделение энантиомеров аминокислот методом обращенно-фазовой
хроматографии [63].
Неподвижная фаза: сферисорб LC 18, б мкм; элюентг 0,008 М М,К-ди-м-
пропил-1--аланнн и 0.004 М ацетат меди(1) (pH 5,5), 1%-ный ацетоиитрил.
разделения многочисленных пар энантиомеров был использован гидрофильный
гель TSK 2000 PW с привитым комплексом меди и L-Phe, L-Trp или L-His
[67]. Большинство авторов осуществляли обнаружение по поглощению в УФ-
области.
Следует также отметить, что оптические изомеры дансил-производных
аминокислот и эфиров N-ацетиламинокислот были также разделены методом
ВЭЖХ с использованием хиральной подвижной и хиральной неподвижной фаз
соответственно [68, 70].
4.2. Пептиды
4.2.1. Введение
Пептидами называют продукты ковалентного связывания двух и более
аминокислот, имеющие следующую общую формулу:
NH,-
NH-C-C
Предыдущая << 1 .. 71 72 73 74 75 76 < 77 > 78 79 80 81 82 83 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed