Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
система до сих пор не потеряла своего значения, так как оборудование,
используемое для разделения, очень несложно, а длительность анализа
невелика. Несколькими годами позднее было впервые успешно проведено
разделение производных всех стандартных аминокислот на одной колонке с
применением градиентного элюирования. Соответствующая хроматограмма
представлена на рис. 4.12.
В настоящее время число систем, предназначенных для
хроматографического разделения аминокислот, весьма велико; некоторые из
наиболее удачных систем представлены в табл.
4.2.
В основу многих из таких систем положена оригинальная •схема
градиентного элюирования, разработанная Циммерманом и др. [37]; см.,
например, рис. 4.13.
t.MHH
Рис. 4.13. Разделение ФТГ-производных аминокислот методом обращенно-
фазовой хроматографии Г431.
Неподвижная фаза: ультрасфер ODS; элюент: 5% ТГФ в 0,042 М ацетате
натрия (pH 5,16)/10%-ный ГГФ ¦ ацетонитриле; температура: 45 °С.
I - цистеиновая кислота; 2 - Asp; 3- Cys (CM); 4 - Glu; 5 - Asn; 6 -
Ser; 7 - Gin;
S -Thr; 9 - Gly; JO - His; // -Met(Oj); 12 - Ala; 13 - Hyp; 14 - Tyr; 15
- Cys(Me);
16 - Pro; 17 - Met; 18 -Val; 19 - Arg; 20 - Trp; 21 - Phe; 22-lie; 23-
Lys; 24 - Leu;
2.; - Nle.
194 Глава 4
Таблица 4.2. Системы дли разделения феиилтиогидаитоиновых производных
Неподвижная фаза Режим Время Темпе
элюиро анализа, ратура,
вания8 мин °С
Зорбакс ODS Р 20 62
Г 48 ---20
Сферисорб S5-ODS Г 23 37
Зорбакс CN г 28 31
(Х-Боидапак фенил г 60 }
Ультрасфер ODS г 37 45
ц-Бондапак С]8 г 30 37
Зорбакс ODS г 26 55
Зорбакс CN г 36 31
Ультрасфер ODS г 13 50
Зорбакс ODS г 19 62
Si 60 и 2X5 --- 20
Зорбакс ODS и 14 55
R-Sil С-18 и 23 64
Зорбакс ODS+ и 35 52
+лихросорб RP-18
Зорбакс ODS и/г 20 60
Лихросорб RP 18 и 14 62
Ультрасфер ODS и 9 55
Ультрасфер ODS и 20 55
*Г - градиентное, и - изократическое элюирование. (r) В скобках даиы не
вполне
Однако системы, в которых используется градиентное элюирование, имеют
ряд недостатков, поэтому разработка методик изократического разделения не
прекращалась. Примеры такого варианта разделения приведены в табл. 4.2 и
на рис. 4.14.
Изократическое элюирование ФТГ-производных аминокислот имеет ряд
следующих преимуществ перед градиентным элюированием: хорошая
воспроизводимость при разделении чрезвычайно сложных проб, особенно после
смены колонки, удовлетворительно разрешение большого числа проб и - самое
важное - высокая стабильность нулевой линии детектора
Аминокислоты, пептиды, белки 195
(ФТГ) аминокислот
Неразделяющиеся стан Дополнительно разделяющиеся амино Лите-
дартные аминокислоты (r) кислоты и их производные ратург
Val/Met, Arg? His? Met(Oj), Hyp, Cys(Me) 37
Hyp 39
(Val/Met) Cys(CH2CONH2), Hyp ' 40
(Ile/Trp/Phe/Leu) 41
42
Met(02), Hyp, Cys(Me), NIe 43 ,
Nva 44
Arg? His? 45
Asp? Glu? Asp(OMe), Glu(OMe) 46
Glu/Asn Met(O), Asp(OMe), Glu(OMe), 47
Cys(CH2COOMe), NIe.
ФТГ-Gly (OMe), ФТГ-Р(ОМе), PTU,
DPTU
Pro/Trp Аминокислоты с защитой в боковой 48
цепи
Arg? His? Asp(OMe), Glu(OMe) 38
Ser/Gln Hyp, сукцинил-Lys, NIe 49
(Gln/Ser) 50
Ser? NIe 51
NIe 52
(Gln/Ser) Met(Oj), Hyp, Asp (OMe), Glu (OMe), 53
Aib, Abu, Cys(Me), Cys(CH2COOMe),
Hyl, Nva, Cys((r)TrAet), NIe, PTU,
DPTU
Asp (OMe), Glu (OMe), Abu, Cys (Me), 54
