Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 70

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 296 >> Следующая

проводилось при 200 нм. В описываемом примере перед экспериментаторами
стояла задача - определить свободные аминокислоты в растворах для
внутривенных вливаний и ряде других фармацевтических препаратов.
Поглощающие в УФ-области примеси, содержащиеся в гидролизате белков,
могут искажать интерпретацию хроматограммы, особенно вблизи предела
обнаружения.
t.MKH
Рис. 4.2. Разделение стандартной смесн свободных аминокислот (3 нмоль)
методом нон-парной хроматографии [5].
Неподвижная фаза: ц-бондапак Си; элюент: А - pH 2,85, 0,07%-ный
децнлсульфат ам-мония/0,5%-ная уксусная кислота, Б - 0,12%-ный
гептансульфонат/0,25%-ная уксусная кислота/20%-ный ацетонитрнл/10%-ный
метанол, элюирование в ступенчатом градиентном режиме; послеколоночная
модификация: фталевый альдегид/2-меркаптоэтаиол.
Рис. 4.3. Схематическая диаграмма оборудования для послеколоночной
модификации [5].
1. 2 - резервуары для элюента; 3 - насос; 4 - программатор градиента; 5 -
система ввода проб; 6 -колонка; 7 - резервуар с реагентом для синтеза
производных; 8 - иасос; 9~ Т-образный смеситель; 10 - трубчатый реактор;
// - УФ-детектор; 12 - самописец.
12-1489
478 Глава 4
t.MHH t, мин
Рис. 4.4. Разделение свободных аминокислот [7].
Неподвижная фаза: а - модифицированный нонами Си(II) партисил 5; б -
модифицированный иоиами Cu(II) сферосил ХОД 600; элюеит: а -
вода/ацетоиитрил (52 : 48)/0,I5 М аммиак, 6 - Вода/ацетонитрил (50 :
50)/0.17 Л1 аммиак.
4.1.2.2 Лигандообменная хроматография. Лигандообменная хроматография
основана на способности анализируемого соединения образовывать лабильные
комплексы с ионами, связанными, как правило, с неподвижной фазой ионной,
ковалентной или координационной связью. На рис. 4.4 показана
хроматограмма 20 распространенных аминокислот, полученная при их
разделении посредством двукратного последовательного элюирования,
проводимого в изократическом режиме [7]. В использованной авторами этой
работы методике лигандообменная хроматография объединена с нормально-
фазовой распределительной; разделение проводилось на колонке с немо-
дифицированным силикагелем, обработанным сульфатом меди (П)/аммиаком. При
этом ионы меди оказывались прочно связанными с силикагелевой основой.
Такая колонка не выдерживает длительного употребления, но стоимость ее
невысока, и ее легко изготовить. Обнаружение проводилось при 210 нм.
4.1.2.3. Ионообменная хроматография. Согласно стандартной методике,
аминокислоты разделяют на сшитых сульфо-полистирольных смолах, используя
цитратные буферные рас-
Аминокислоты, пептиды, белки
179
творы в качестве элюента и послеколоночную модификацию нингидрином,
флуорескамином и фталевым альдегидом для обнаружения (структуры
образующихся производных приведены ниже).
о
0: о
Нингидрин
О
+ NH,-СНН-С02Н
ОС*(tm) *ксно"С01 +
о
Гидриндантин
О
ОН
О
О
ОН
+ NH,
О
Пурпурный
О + rnh2
О
Флуорескамин
|Т + HS-CHj-CH2-OH + h2n-r -* сно
Фталевый СН2-СН2-ОН
альдегид s
Флуорескамин и фталевый альдегид - нефлуоресцирующие реагенты, которые
взаимодействуют с первичными аминами в щелочной среде с образованием
флуоресцирующих производных. Производные фталевого альдегида отличаются
большей интенсивностью флуоресценции, чем производные флуореска-мина.
Кроме того, фталевый альдегид имеет еще одно преимущество по сравнению с
флуорескамином - он растворим в воде. Ни один из реагентов не
взаимодействует с вторичными аминами, что исключает возможность
обнаружения этим способом пролина. Этот недостаток можно преодолеть,
окисляя пролин в элюате гипохлоритом натрия [8, 9] или УУ-хлор-п-то-
лилсульфонамидом натрия (хлорамином Т) [10]. Однако очень
12"
t.MMH
Рис. 4.5. Разделение смеси аминокислот (2,5 нмоль), аминосахаров (4,4
нмоль) и нейтральных сахаров (4,4 нмоль) методом ионообменной
хроматографии [11].
Неподвижная фаза: смола DC-8-9 для разделения аминокислот и аминосахаров
н смола DA-X-8-8 для разделения нейтральных сахаров; элю-ент: буферные
растворы цитрата и бората натрня, элюирование в градиентном режиме при
программировании температуры.
/ - Asp; 2 - Thr; 5~Ser; 4 - Glu; 5 - Pro; 5 - Gly; 7 - Ala; 5 - Cys; 0
- Val; 10 - Met; // -?; 12 - lie; 13 - Leu; 14 - Tyr; 15 - Phe; 16 -
галактозамнн; 17 глюкозамнн; /в-^Lys; /5 -аммиак; 20- His; 21 - Arg; 22 -
сахароза; 23 - трегалоза; 24 - деллобноза; 25 -мальтоза; ^6 - рамиоза; 27
- лактоза; 28 - рнбоза; 29 - маинова; 30 - фруктоза; 31 - арабиноза; 32 -
галактоза; 53 - ксилоза; 54 -глюкоза* 55 - ген-тооноза; 36 - мелнбиоза;
37 ~ фукоза.
Аминокислоты, пептиды, белки 181
важно, чтобы окисляющий агрегат контактировал с элюатом только в
необходимый момент времени, так как он способен вызывать разложение
других аминокислот.
Предыдущая << 1 .. 64 65 66 67 68 69 < 70 > 71 72 73 74 75 76 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed