Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 56

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 50 51 52 53 54 55 < 56 > 57 58 59 60 61 62 .. 296 >> Следующая

определяется величиной электрического поля и силами трения в жидкости.
Молярная проводимость бесконечно разбавленных растворов До - это
специфическая характеристика соединения. Однако в растворах конечной
концентрации становятся значительными электрофоретический перенос в
обратном направлении и релаксационные процессы, и Л зависит от
концентрации. В присутствии буферных ионов изменение проводимости,
обусловленное наличием анализируемого вещества, может, таким образом,
оказаться в значительной степени замаскированным.
В хроматографии это может привести к важным последствиям, так как,
чтобы точно регистрировать профиль концентрации элюируемого компонента,
детектор должен обладать постоянной, не зависящей от концентрации
чувствительностью. К счастью, концентрация пробы обычно бывает
значительно ниже 10-3 моль/л. Учитывая, что на колонке в соответствии с
ее размерами, фактором емкости и числом теоретических тарелок происходит
дополнительное разбавление пробы в 5- 50 раз, вполне допустимо считать,
что молярная проводимость анализируемых ионов постоянна.
Следует всемерно стремиться к подавлению эффектов, создаваемых
буферными нонами подвижной фазы. Поскольку вода в большинстве случаев
непригодна в качестве подвижной фазы для разделения ионов, отказаться от
буферных растворов не представляется возможным. Следовательно, необходимо
выбирать подвижную фазу с минимально допустимой концентрацией буферных
компонентов. Очень красивое решение этой дилеммы описано Смолом и др.
[45]: путем остроумного подбора состава буфера подвижной фазы и так
называемой компенсационной колонки буферные ионы после проведения
процесса разделения на рабочей колонке практически полностью удаляются
подсоединенной последовательно компенсационной колонкой.
Принципы измерения. В отличие от описанных в следующем разделе
электрохимических детекторов при применении детекторов данного типа
следует избегать протекания так называемых гальванических процессов на
поверхности электродов, т. е. электрохимических реакций. Поэтому
используются источники переменного тока с частотой от 50 до 1000 Гц и
напряжением от 5 до 10 В. Кроме того, поверхность электродов
платинируется, что повышает их поляризуемость и емкость и соответственно
снижает до минимума фарадеевы токи.
Подвижность ионов сильно зависит от температуры. Со-
Аппаратура 141
Земля Чувствительность
Рис. 3.24. Блок-схема современного кондуктометрического детектора для
ВЭЖХ (с разрешения Dr. Н. Кпаиег ВегНп/ЬRG>.
гласно литературным данным, коэффициент температурной зависимости
составляет до 2%/град. Высокие требования к точности и воспроизводимости
детекторов, необходимые в ВЭЖХ, могут быть удовлетворены путем введения в
измерительную цепь ячейки сравнения, которую можно заполнить подвижной
фазой и герметично закрыть либо прокачивать через нее подвижную фазу
непрерывно. Сигналы, полученные с рабочей ячейки и ячейки сравнения,
могут служить для уравновешивания двух преобразователей.
Измерения проводятся с применением моста сопротивлений Уитстона или
просто в соответствии с законом Ома. Схема устройства, основанного на
последнем принципе, приведена на рис. 3.24.
Рекомендации по применению. Совершенно очевидно, что детекторы данного
типа наиболее пригодны для определения заряженных соединений в элюате.
Несмотря на то что многие из этих соединений (органические и
неорганические ионы) имеют полосу поглощения в УФ-области спектра, работа
со спектрофотометрическими детекторами в области коротких длин волн
сопряжена с множеством неудобств. Кондуктометриче-ские детекторы для ВЭЖХ
представляют отличный и экономичный способ обнаружения, который особенно
предпочтителен для определения малых концентраций ионов. Методика
удаления буферных ионов подвижной фазы, предложенная Смолом и др. [45], в
значительной мере способствовала развитию этой области. В настоящее время
в продажу поступают системы (Dionex), специально разработанные с учетом
требований ионного анализа.
3.6.5.2. Вольтамперометрические и кулонометрические детекторы. Общие
принципы. Для объяснения принципа дейст-
142 Глава 3
Рис. 3.25. Вольтаыперограмма электроактнвного соединения, на которой вид*
иы волна восстановлении н волка окисления.
-----зависимость тока от напряжения в отсутствие электроактнвного
анализируемого
вещества.
вин детекторов этого типа на рис. 3.25 приведена типичная зависимость
(ток - потенциал) для электроактнвного соединения в статических (т. е. в
ячейке) условиях. Эта кривая называется вольтамперограммой (или
полярограммой, если она получена с помощью ртутного капающего электрода).
Картина не изменится, если раствор протекает через ячейку, как в случае
ВЭЖХ. Получаемая при этом кривая называется гидродинамической
вольтамперограммой, и ее единственное отличие от вольтамперограммы
заключается в невозможности ее непрерывной регистрации.
Характерная особенность вольтамперограммы - наличие участка тока, на
Предыдущая << 1 .. 50 51 52 53 54 55 < 56 > 57 58 59 60 61 62 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed