Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
автоматическая установка длины волны и автоматическая корректировка
нулевой линии детектора сопряжены с работой интегратора таким
Рис. 3.21. Оптическая схема детектора с переменной длиной волны и
устройством для ее быстрой автоматической смены (с разрешения Hewlett-
Packard GmbH, Waldbronn, FRG).
Для выбора необходимой длины волны два-фотодиода смещают независимыми
шаговыми электродвигателями по поверхности (сфере), на которую
проецируется изображение спектра.
образом, что детектор при выполнении очередного шага временной программы
смены длин волн ожидает, пока происходит элюирование пика и пока
интегратор не зарегистрирует его окончание. При работе в таком режиме
программирование длин волн можно также использовать для анализа хромато-
Направляющее
Рис. 3.22. Оптическая схема детектора с переменной длиной волны и
устройством для ее быстрой автоматической смены (с разрешения Beckman
Instruments Co.).
Для выбора необходимой длины волны монохроматор быстро поворачивается с
помощью приводного механизма.
134 Глава 3
грамм, содержащих большое количество пиков, без риска упу-стить какую-
либо важную качественную информацию.
Программируемые детекторы данного типа могут также применяться для
снятия УФ-спектров отдельных элюируемых веществ и (или) измерения
отношений поглощения (т. е. отношения поглощения элюируемого вещества на
различных длинах волн). Эта информация может быть очень полезной в
качестве доказательства идентичности пиков. Примеры того, как эти
характеристики могут быть использованы в практике ВЭЖХ, обсуждены в
работе [30].
Последнее достижение в этой области - разработка детектора с гребенкой
диодов (ДГД). Линейная гребенка фотодиодов представляет собой кремниевую
основу, на которой методами полупроводниковой технологии в одну линию
длиной примерно 2 см нанесено большое количество (от 200 до 1000)
крошечных фотодиодов. Каждому фотодиоду соответствует встроенное
считывающее устройство, основу которого составляет конденсатор,
заряженный до определенного напряжения и разряжающийся через фотодиод в
течение промежутка времени между процессом разрядки и считывания.
Напряжения (токи) разряда периодически измеряются (и конденсатор
перезаряжается) через определенные временные интервалы, например 10 с,
давая практически одновременную информацию об интенсивности света,
поступившего на каждый фотодиод за этот промежуток времени.
Как показано на оптической схеме такого детектора (рис. 3.23), спектр
поглощения элюата в кювете детектора отображается на гребенке диодов.
Таким образом, в течение каждого интервала считывания сигнальной
электронике передается полный спектр с разрешением, определяемым
спектральным диапазоном (и шириной входной щели) элемента, рассеивающего
свет по ширине гребенки (например, от 200 до 600 нм), и числом диодов,
составляющих гребенку (например, 200). Подробная информация о принципах
действия спектрометра с линейной гребенкой диодов дана в работе
[31].
Очень быстрое квазипараллельное и квазинепрерывное получение полного
УФ/ВИД спектра поглощения пробы (при условии что детектор имеет
соответствующую мощную сигнальную электронику) дает значительную
дополнительную информацию об элюате, выходящем из колонки, получение
которой было бы трудоемким и потребовало бы много времени при работе с
обычным УФ-детектором. Используя подходящий графический экран, можно
получать трехмерные записи хроматограмм при обнаружении на различных
длинах волн, позволяющие быстро сделать вывод об оптимальной для
обнаружения длине волны для каждого пика на хроматограмме. "Мгновен-
Аппаратура
Рис. 3.23. Оптическая схема детектора с линейной гребенкой фотодиодов
(ДГД) (с разрешения Hewlett-Packard GmbH, Waldbronn, FRG).
ная" запись спектров с различным положением одного и того же пика может
показать, соответствует ли этот пик чистому компоненту пробы. Аналогичную
информацию по всей хроматограмме можно получить путем непрерывной записи
соотношений поглощения. Сопоставление легко получаемых спектров отдельных
пиков или всех пиков, представляющих интерес, с хроматограммой (или
хроматограммами) проб облегчит идентификацию компонентов и поможет
подтвердить идентичность составляющих пробы. Путем выбора большего
диапазона обнаружения (усредняя сигналы нескольких фотодиодов) можно
улучшить соотношение сигнал/шум, что, однако, приводит к снижению
линейности отклика, как указывалось в разд. 3.6.3.1,6. Другой путь
улучшения соотношения сигнал/шум - усреднение сигнала за несколько или
даже много интервалов считывания; при этом соответственно увеличивается
постоянная времени детектора с возможными изменениями качества разрешения
хроматограммы (разд. 3.6.1.4).
3.6.4. Флуориметрический детектор
Флуориметрическое обнаружение, несмотря на ряд преимуществ по сравнению с
абсорбционным обнаружением, в частности по пределу обнаружения и
специфичности во многих
136 Глава 3
ЖХ-приложениях, до сих пор не получило того широкого применения, которое
