Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
выпускаются промышленностью.
В условиях ВЭЖХ разделение проводится при повышенном давлении.
Вследствие этого из соображений безопасности стенки трубки должны иметь
определенную толщину. У наиболее часто используемых трубок диаметром 0,25
дюйма внутренний диаметр равен 4,6 мм, а толщина стенок равна 0,9 мм, что
вполне приемлемо. Некоторые фирмы выпускают трубки тех же диаметров, но с
большей толщиной стенок, что позволяет делать торцевые соединения
непосредственно в трубках (см. далее).
3.4.2. Торцевые соединения колонок
Торцевое соединение колонки и блока фильтра соединяет слой носителя с
приборами, используемыми в ВЭЖХ. Основная функция этого устройства -
фиксация слоя носителя, на который воздействует высокое давление, и
защита от нерастворимых частиц, поступающих с подвижной фазой и способных
нарушить его структуру. Кроме того, торцевое соединение должно
обеспечивать плавный перенос подвижной фазы из соединительного капилляра
(внутренний диаметр от 0,1 до 0,2 мм) в колонку большего диаметра. Таким
образом, торцевое соединение с блоком фильтра оказывает определяющее
влияние на разрешающую способность колонки. На рис. 3.13
Аппаратура 117
Участок
распределения
потока
Участок 1
подключения капилляра
Участок подключения колонки
•-Капилляр
Внутренний
диаметр
колонки
'-Фильтр -Неподвижная Фаза ¦ Распределитель потока • Стыковочное
отверстие
Рис. 3.13. Схема торцевого соединения колонки.
Рис. 3.14. Функция распределителя потока.
приведена схема торцевого соединения, иллюстрирующая его
функции.
На схеме соединения можно выделить три узла: узел перераспределения
потока, узел подключения колонки и узел подключения капилляра.
На первом из них (рис. 3.14) поток подвижной фазы, содержащий
компоненты пробы, переносится из капилляра на носитель колонки через
выпускное отверстие, распределитель потока и блок фильтра. Распределитель
потока обеспечивает равномерное распределение потока по всей поверхности
фильтра.
Конструкция устройства обеспечивает использование всей поверхности
фильтра и распределение пробы по всей торцевой поверхности слоя носителя,
что позволяет избежать локальной
118 Глава 3
перегрузки колонки, которая возможна, если образец вносится в центр слоя
носителя [15]. Тем не менее диаметр фильтра следует выбирать меньше, чем
диаметр колонки, чтобы избежать попадания компонентов пробы в менее
плотно упакованные пристеночные слои носителя.
Очевидно, что объем выпускного отверстия, перераспреде-лителя потока и
блока фильтра должен быть разработан с учетом объема колонки для
подавления размывания полос в торцевом соединении. Как правило, мертвый
объем торцевого соединения должен составлять менее 1 % объема
незаполненной колонки. В пределах этих ограничений возможны самые
различные варианты конструкций распределителя потока и блока фильтра.
Конструкция этого узла подробно изучается с целью ее оптимизации [16,
17].
Предпочтительно, чтобы конструкция входного и выходного соединений
была однотипной. Все сказанное выше (см. рис. 3.14) имеет место и для
подвижной фазы, покидающей слой носителя. Кроме того, симметричная
конструкция допускает обратное направление потока и промывку колонки, что
очень удобно для удаления нерастворимых частиц с поверхности фильтра и
слоя носителя колонки.
Фильтрующий элемент представляет собой пористый диск (таблетку) из
нержавеющей стали марки 316 или лист (мембрану) из пористого тефлона.
Вследствие низкой механической прочности такие мембраны применяются
совместно с подложкой, представляющей собой металлический экран, который
может служить также и распределителем потока. Размеры пор в таблетках и
мембранах должны быть меньше самых малых частиц носителя в 5-10 раз (т.
е. 2-1 мкм для частиц диаметром 10 мкм).
Поскольку носитель подвергается воздействию высокого давления (до 800
бар в процессе набивки колонки), фильтрующий элемент должен иметь опору.
Она представляет собой металлическую деталь, которая называется
стыковочным узлом. Одной стороной он стыкуется с внешней частью колонки,
а с другой стороны к нему можно присоединить капилляр, как, например,
показано на рис. 3.15.
Аппаратура 119
Таблица 3.1. Стандарты соединений капилляров
Внешний Фирма-изготовитель (фирменное Детали
диаметр, название)
дюйм (мм)
1/16 (1,6) Crawford Fitting Передняя и задняя уплотни
Company тельные муфты, расстояние
(Swagelok) 1,6 мма
Parker Hannifin Уплотнительная муфта, рас
стояние 1,6 мма
Valeo Уплотнительная муфта, рас
стояние 2,5 мма
