Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 44

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 296 >> Следующая

Три распределительных клапана, открывающихся последовательно на заданные
промежутки времени, определяют соотношение растворителей в элюенте.
подает растворители 1, 2... в течение интервалов времени А^ь At2... (рис.
3.10). Если скорость поступления растворителей F в насос постоянна, их
объемное отношение в смеси определяется отношением указанных интервалов
времени Atu At2..., в течение которых клапаны Vu V2. ¦. остаются
открытыми, и суммарным временем подачи растворителей:
Растворитель & = (А^/ЕАг'г) 100, об. %
Обычно интервалы Ati синхронизованы с временем всасывания насоса Atp,
которое определяется периодом открывания и закрывания впускного клапана
насоса, т. е. 'Lti = tp. Следовательно, объединение возвратно-
поступательного насоса и блока
112 Глава 3
распределительных клапанов другого производства не обеспечит требуемой
точности смешения растворителей, если только возможность такого
объединения не предусмотрена самим производителем насоса.
Смешение растворителей в любом из устройств осуществляется по "методу
сложения объемов", изменения объема, происходящие в процессе смешения,
при этом не учитываются. Это необходимо иметь в виду, особенно при работе
со смесями вода/метанол, когда сравниваются результаты изократическо-го
разделения в хроматографах с автоматическим смешением растворителей и в
таких хроматографах, в которых смесь готовится предварительно в отдельной
емкости. Для того чтобы можно было сравнивать значения коэффициента k,
объемы всех растворителей следует измерять до смешения.
3.3. Ввод пробы
3.3.1. Общие соображения
Хроматографическое разделение по своей сути является непрерывным
процессом, и в свете представлений гидродинамики ввод пробы нарушает
равновесные условия в системе. И разработчики хроматографов, и
хроматографисты-аналитики должны заботиться о том, чтобы эти нарушения
были минимальными. Для сохранения высокой разрешающей способности колонки
пробу следует вводить через узкую заглушку. Чтобы результаты
количественного анализа были точными, пробы строго определенных объемов
необходимо вводить так, чтобы не нарушались равновесные условия.
Кроме того, система ввода пробы должна удовлетворять и ряду других
требований.
Необходимо предусмотреть возможность ввода различных объемов пробы.
Объем аналитических проб составляет от 0,5 до 20 мкл, а объем
препаративных проб - от 0,1 до 5 мл.
При последовательном вводе различных образцов взаимное загрязнение
должно быть минимальным.
Должна быть предусмотрена возможность автоматизации.
Устройство не должно быть слишком сложным, чтобы с ним нетрудно было
работать и чтобы оно было надежным.
Однако разработать систему, одинаково хорошо удовлетворяющую всем
перечисленным выше требованиям, достаточно сложно, вследствие чего
приборы, которыми располагают хроматографисты, имеют и определенные
достоинства, и недостатки. Таким образом, пользователь самостоятельно
выбирает систему, наиболее полно отвечающую его требованиям [10, И].
Аппаратура 113
3.3.2. Типы систем ввода пробы
Системы ввода пробы в ВЭЖХ можно разделить на две группы: в приборах
одной группы используется принцип шлюзового устройства, в приборах другой
группы - петля для ввода пробы.
3.3.2.1. Системы ввода шлюзового типа. В данном случае ввод пробы
осуществляется в виде временного приращения потока, создаваемого при
помощи шприца. Подвижная фаза может при этом подаваться с прежней
скоростью или останавливаться. При низких давлениях уплотнительным
элементом,, через который игла шприца вводится в систему, может служить
эластичная перегородка. Хроматографы, работающие при более высоком
давлении, оснащены специальными уплотняющими приспособлениями и кранами-
дозаторами. Системы ввода данного типа использовались в ВЭЖХ на ранней
стадии разработки метода, поскольку аналогичная техника ввода пробы
обычна для газовой хроматографии. Однако в таких системах ввода трудно
обеспечить отсутствие протечек при высоких рабочих давлениях и химическую
инертность уплотняющих элементов, и как следствие область применения
систем этого типа постоянно сужается.
3.3.2.2. Система ввода типа петли. На рис. 3.11 показана система
ввода проб переменного объема. Пробу сначала отмеряют шприцем, а затем
вводят через вход 4 6-канального поворотного крана в дозирующую петлю.
Эта процедура выполняется при атмосферном давлении. Избыток
растворителя,, первоначально находившийся в петле, замещается пробой и
вытекает через вход 3 в слив. В позиции "Заполнение" подвижная фаза
поступает от насоса на колонку через каналы t и 6. После переключения
крана в положение "Ввод" растворитель направляется через входы 5 и 6 на
колонку. Между входами 4 и 5 остается небольшое количество пробы, поэтому
перед вводом следующей пробы во избежание ее загрязнения' кран необходимо
промыть.
В описанной системе ввода образца измерение его количества
осуществляется с помощью шприца. Петля обычно заполняется только
Предыдущая << 1 .. 38 39 40 41 42 43 < 44 > 45 46 47 48 49 50 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed