Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 41

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 296 >> Следующая

увеличением температуры на lloC. Воздушные пузырьки образуются также при
смешении растворителей на стороне низкого давления перед насосом,
например при смешении воды и метанола (растворимость воздуха в смеси
ниже, чем в отдельных растворителях).
Газовые пузырьки могут образовываться и в ячейке детектора, ухудшая
стабильность его нулевой линии. Этого можно избежать, установив небольшой
ограничитель потока на выходе из детектора. Гораздо менее изучено влияние
растворенных
Аппаратура 103
газов на сигнал многих детекторов для ЖХ. Экспериментальные данные,
подтверждающие влияние растворенного воздуха (кислорода) на УФ- и
флуоресцентные детекторы, опубликованы в работах [3, 4]. Коэффициент
преломления подвижной фазы также зависит от количества растворенного в
ней газа. Как следствие при изменении содержания газа в растворителе
возможен дрейф нулевой линии (это может происходить при изменении
температуры в резервуаре с растворителем). Полная деаэрация подвижной
фазы особенно важна при использовании электрохимического детектора в
восстановительном режиме.
Наиболее распространенная процедура деаэрации растворителей в ВЭЖХ -
их продувка гелием или азотом. С этой целью растворитель (1 л) обычно
продувают в течение 10 мин газом со скоростью 100 мл/мин, после чего
скорость продувки можно снизить до 10 мл/мин. При этом следует помнить,
что в данном случае воздух, растворенный в подвижной фазе, заменяется на
азот или гелий. Если используются насосы, клапаны которых чувствительны к
образованию пузырьков, более предпочтительным может оказаться
деаэрирование путем нагрева или вакуумирования.
3.2.2. Насосы для подачи растворителя
Насосы для подачи растворителя создают "постоянный" поток подвижной фазы
под давлением, необходимым для преодоления гидродинамического
сопротивления колонок. Прежде чем обсуждать методы, наиболее часто
используемые для решения этой задачи, необходимо рассмотреть, насколько
важно требование постоянства объемной скорости при проведении
количественного и качественного анализов методом ЖХ.
3.2.2.1. Стабильность потока и точность анализа. В процессе
элюирования анализируемое соединение распределяется в; определенном
объеме подвижной фазы, который называется объемом пика V. Вместе с
потоком подвижной фазы это соединение проходит через ячейку детектора,
формирующего выходной сигнал, пропорциональный концентрации
анализируемого соединения в объеме пика, и регистрируется в виде пика
шириной Wb (в единицах времени) на ленте самописца, подключенного к
детектору.
Wb = V/F (если F=const)
где F - объемная скорость подвижной фазы.
Поскольку площадь пика определяется его высотой и шириной, совершенно
очевидно, что эта наиболее часто употреб-
104 Глава 3
ляемая характеристика пиков непосредственно зависит от изменений объемной
скорости при прохождении соответствующей зоны (пика) через ячейку
детектора.
Кроме того, изменение объемной скорости подвижной фазы влияет также на
эффективность колонки (высоту, эквивалентную теоретической тарелке), что
проявляется в определенной зависимости высоты пика (и его ширины) от
объемной скорости подвижной фазы.
Время удерживания tR, используемое для качественного отнесения пика
соединения, также зависит от объемной скорости подвижной фазы:
= " Ум и Ir = ~ У м (1+
где Vm - мертвый объем подвижной фазы в колонке, tm - мертвое время
колонки, или время выхода инертного несорби-руемого соединения (k = 0).
По различному воздействию на результаты анализа флуктуации потока
растворителя можно подразделить на шумы, блуждания и дрейф, которые можно
охарактеризовать отношением их собственного времени воздействия к средней
продолжительности выхода пика и его времени удерживания [6].
Шумы, потока, основной период флуктуаций которых меньше средней ширины
основания пика, в основном ответственны за шумы нулевой линии детекторов
(особенно рефрактометрических и электрохимических) и, таким образом,
влияют на идентификацию пиков электронными интеграторами (в области малых
отношений сигнал/шум) и на пределы обнаружения.
Блуждания потока характеризуются периодом флуктуаций, равным 1 -10
величинам средней ширины основания пика. Они непосредственно влияют на
точность определения площади пика. Величина их воздействия определяется
отношением основного периода флуктуаций к ширине основания пика. Как
показывает рис. 3.2, блуждание потока достигает максимума воздействия на
точность определения площади пика в области периода флуктуаций, равного
5-10 величинам основания пика [6, 7].
Дрейф потока характеризуется периодом флуктуаций, превышающим время
удерживания пика. Он одинаково влияет на время удерживания пика и его
площадь: увеличение объемной скорости ведет к уменьшению времени
удерживания и площади пика, и наоборот. В результате с увеличением
периода флуктуаций, т. е. при длительном увеличении или уменьшении
объемной скорости, количественные ошибки становятся систематическими.
Предыдущая << 1 .. 35 36 37 38 39 40 < 41 > 42 43 44 45 46 47 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed