Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
тирозина в дигидроксифенилаланин позволяет определять активность фермента
тирозингидроксилазы [74].
При помощи ВЭЖХ было осуществлено разделение и определение таких
кислот или групп кислот, как гиппуровая [6], мочевая [75], хинолиновая
[35], урокановая [76], алифатические и ароматические оксокарбоновые
кислоты [28, 30, 40, 41] и жирные кислоты [29]. Пример разделения жирных
кислот показан на рис. 13.3.
В литературе описаны примеры исследования профилей органических кислот
методами обращенно-фазовой [18, 77] и анионообменной [10, 11] ВЭЖХ. Как
показывает хроматограмма, приведенная на рис. 13.4, эффективность
разделения достаточно хорошая.
В описанных выше примерах применения ВЭЖХ для обнаружения были
использованы УФ- и электрохимические детекторы, а также детекторы по
флуоресценции.
Газохроматографическое разделение органических кислот осуществляется
на капиллярных колонках, стеклянных или кварцевых, которые пришли на
смену набивным колонкам. Наилучшие результаты получены на фазах OV-17,
OV-lOl и SE-30. Для обнаружения наиболее широко используется
пламенноионизационный детектор.
Следует подчеркнуть, что каждый исследователь, занимающийся
хроматографическим разделением органических кислот, не должен забывать о
возможности появления ложных пиков, которое может быть связано с
предварительной обработкой про-
Время мин
Рис. 13.4. Хроматограмма мочи здорового мужчины [10].
Колонка: 500X4 мм (внутр. диаметр); неподвижная фаза: диаион CDR-10.
1 - трнгонеллин; 3 - креатин+креатинин; 6 - псевдоуриднн; 9 - пиридокснн;
11- ура-цил; 18 - гипоксантии; 25- ксантии; 35 - урокановая кислота; 41 -
мочевая кислота; 43 - 2-аминО'З-гидроксибензоилглицин; 48 -
диметилуроновая кислота; 51 - 5-гндроксиме-тил-2-фуроилглицин; 57 - 2-
фуроилглиции; 59 - 5-гидрокснметил-2-фуранкарбоиовая кислота; 66 - З-
метоксн-4-гидрокснфеиилуксусная кислота; 68 - гиппуровая кислота; 73 -
хинальдиновая кислота; 74 - 3-гидроксибензоилглипин; 88-бензойная
кислота; 92 - ин-долилуксусная кислота.
622 Глава 13
бы или с собственно процессом разделения. Вероятность появления ложных
пиков при разделении методом ГХ выше из-за использования высоких
температур. Причиной ошибок может быть также влияние лекарственных
средств и лечения.
Некоторые примеры появления ложных пиков и других помех описаны в
обзоре, посвященном исследованию состава физиологических жидкостей
человека [78]. Многие другие примеры такого рода рассмотрены в
специальных работах [52, 79, 80].
Число публикаций, посвященных изучению органических кислот, очень
велико.
13.3. Органические кислоты как маркеры нарушений метаболизма
В литературе описано более чем 250 органических кислот. Известно примерно
еще столько же, но их структура не установлена. Эти кислоты содержатся в
сыворотке крови и (или) моче здоровых людей в самых различных
концентрациях. Физиологические отклонения, например врожденные дефекты
метаболизма, эндокринологические дефекты, определенные виды опухолей,
заболевания печени и почек, вызывают весьма резкие изменения содержания
какой-либо одной кислоты или одного либо нескольких классов кислот.
Однако в большинстве работ в каждом конкретном случае рассматриваются
лишь ограниченное число кислот либо кислоты какого-либо одного класса,
изменение содержания которых в биологических жидкостях связано с
нарушением метаболизма.
Однако в ряде работ исследован более широкий спектр органических
кислот и приведены подробные данные о содержании их в организме здоровых
людей [25, 26, 33, 34, 37, 45, 81] и пациентов с нарушениями метаболизма
или другими заболеваниями [39, 82, 83], а также изучено влияние на
содержание кислот диеты [84]. В большинстве случаев анализируется состав
мочи.
Органические кислоты, вероятно, представляют собой именно тот класс
низкомолекулярных биологических веществ, хроматографические методы
изучения которых внесли наибольший вклад в наши представления о путях
метаболизма и в разработку подходов к клинической диагностике нарушений
метаболизма, а в ряде случаев позволили разработать соответствующие
диагностические методы. Далее мы рассмотрим примеры нарушений
метаболизма, приводящие к характерному качественному и количественному
изменению содержания органических кислот.
Органические кислоты в организме человека
623
13.3.1. Врожденные нарушения метаболизма
Врожденные дефекты такого рода часто связаны с нарушением метаболизма
аминокислот и вызваны недостаточной активностью ферментов на определенных
стадиях метаболического пути. Такое нарушение метаболизма довольно часто
служит причиной аномального развития детей и приводит к умственной
отсталости. Поскольку, выдерживая таких пациентов на специальной диете,
можно исключить вероятность их аномального развития, то очень важно
установить, функции какого именно фермента нарушены.
Многие из подобных нарушений метаболизма вызывают специфические
органические ацидемии и (или) ацидурии, которые в некоторых случаях
