Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
разделения и анализа. Таким способом отделяют высокополярные вещества
(соли и белки) и увеличивают концентрацию витаминов в образце. Второй
подход развит сравнительно недавно [146, 147] и еще не нашел широкого
применения в анализе витаминов. Потенциальная возможность его применения
представляется весьма многообещающей.
Выбор оптимальных условий для селективного разделения позволяет
исключить влияние побочных продуктов на результаты разделения. Авторы
работы [142] подобрали условия, позволившие удерживать на колонке
производные фолиевой кислоты в результате образования ионных пар in situ
до тех пор, пока из нее не удалялись мешающие определению соединения,
содержащиеся в пробах пищевых продуктов.
Повышение селективности обнаружения - третий возможный путь
совершенствования методики анализа витаминов в биологических пробах.
Наиболее простой подход заключается в пра-
Таблица 12.11. Методы разделения фолиевой кислоты и ее производных при
помощи ВЭЖХ
Исследуемые соединения
Неподвижная фаза
Элюент
Применение
Лите-
ратура
Никотиновая кислота, рибофлавин-монофосфат, фолиевая кислота
Аскорбиновая кислота, никотиновая кислота, никотинамид, фолиевая
кислота, витамин В]2, рибофлавин, тиамин
Никотиновая кислота, витамины В6, В2, С фолиевая кислота, тиамин
Никотиновая кислота, витамины В6, Bi, В2, С, фолиевая кислота
Фолиевая кислота и 9 производных
гс-Аминобензоилглутамат, 5,6,7,8-тет-рагидрофолиевая кислота, 7,8-ди-
гидрофолиевая кислота
Р4-(гс-Аминобензоил)-1 -глутаминовая кислота, 5,6,7,8-тетрагидрофолиевая
и 7,8-дигидрофолиевая кислоты
Ы'-Формилтетрагидрофолиевая кислота, №-метилтетрагидрофолиевая кислота,
фолиевая кислота
Анион ообменник
С-18
-NH2
С-2
Сильный анионообмен-ник
Слабый анионообмеиник
С-18 (ИПХ)
Анионообменник
NaH2P04 (pH 4,4), градиент от 4 до 200 мМ, 10%/мин
ИПХ-А в Н20/метанол (70 : 30)
1 мМ Na2HPO" (pH 3,0)/ ацетонитрил (20 : 80)
А: 0,5% гексадецилтриме-тиламмонийбромид,
Б: метанол; градиент от
5 до 60% Б, 3,8% мин
Градиентное элюирование
25 мМ NaH2P04
35%-ный метанол/Н20/тет-рабутиламмонийфосфат
К.С104, градиент от 0 до
6 мМ, 1 %/мин
Стандартные растворы Стандартные растворы
Стандартные растворы Стандартные растворы
Стандартные растворы Стандартные
Стандартные растворы
Сыворотка крови после обработки фолатом
84
85
86 86
138
139
140
141
Дигидрофолиевая кислота, Ы5-фор- С-18 (ИПХ) 5 мМ
тетрабутиламмоиий- Сыворотка крови после
милтетрагидрофолиевая кислота, фосфат в
смеси метаиол/ обработки фолатом
фолиевая кислота и Ы5-метилтет- Н20 (30:70)
рагндрофолпевая кислота
п-Аминбензоилглутамат, 5,6,7,8-тетра- С-Фенил (ИПХ) 36 мМ NaCIO,,
130 мМ Пищевые продукты, очи
гидоофолиевая кислота, фолиевая КН2Р04, 0,9
мМ КОН, щенные с помощью
кисло га, 7,8-дигндрофолиевая кис 0,5°/о
метанола (после ИПХ
лота. 5-метилтетрагидрофолиевая
уравновешивания тетра-
кислота
бутиламмонийфосфатным
буфером)
я-Амипобензоилглутамат, 5-формил- С-18 (ИПХ) Градиент от 5
мМ тетра- Стандартные растворы
тетрагидрофолиевая кислота, ди-
бутнламмонийфосфатного
гндрофолисвая кислота, 5-метил- буфера до
метанола
тетрагндрофолиевая кислота, фо
лиевая кислота
5-Метилтетрагидрофолиевая кислота Сильный анионообмеи- 50 мМ
иатрийфосфатиый Плазма крови н спинно
ник и С-18 буфер (pH
4,95)/метанол мозговая жидкость;
(4:1)
электрохимическое об
наружение после обо
гащения проб на ко
лонке
га-Аминобензоилглу га м ат, 10-формил- С-18 (ИПХ)
Тетрабутиламмонийфосфат Стандартные растворы
теграгидрофолиевая кислота, А: в воде, Б:
в метаноле.
