Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
пропанол Стандартные растворы 114
амнн
а Перечислены в порядке элюирования.
Витамины 603
тических препаратах исключать. Более того, необходимо позаботиться,
чтобы на стадии предварительной обработки пробы или в процессе ее
хроматографического разделения отличающаяся сильным поглощением в УФ-
области аскорбиновая кислота не окислилась до дегидроаскорбиновой, не
поглощающей в этой области спектра.
Изоаскорбиновая кислота (D-аскорбиновая кислота) в природных
продуктах не обнаружена. Ее биологическая активность в 20 раз ниже, чем у
аскорбиновой кислоты, однако она дешевле, и поэтому ее используют в
качестве добавок в пищевые продукты и соки. Автор работы [127] осуществил
разделение изоаскорбиновой и аскорбиновой кислот на аминофазе при
элюировании 75%-ным раствором ацетонитрила в 5 мМ КН2Р04 (pH 4,4-4,7), а
также сумел определить содержание изоаскорбиновой кислоты в апельсиновом
соке. В работе [84] описана методика определения состава апельсинового
сока. Пробу сока хроматографировали на колонке с сильным анионообменником
зипакс SAX, используя 5 мМ NaH2P04 в качестве элюента.
Возможности применения хроматографического анализа для определения
витамина С в фармацевтических препаратах и пищевых продуктах были изучены
рядом исследователей. Авторы работы [85] разделили аскорбиновую кислоту,
ниацин, ниацин-амид, фолиевую кислоту, витамин В12, рибофлавин и тиамин
на колонке, заполненной ji-бондапаком Cig, элюентом служила смесь
вода/метанол (70:30) с добавкой реагента А для ион-парной хроматографии.
Те же авторы [85] разделили смесь, состоящую из пиридоксина, ниацинамида,
рибофлавина, витамина Bi2, аскорбиновой кислоты и ниацина на колонке с ц-
бондапа-ком NH2 при элюировании смесью 0,125%-ный цитрат/метанол (20:80).
Вандемарк [86] изучил удерживание водорастворимых витаминов, включая
аскорбиновую кислоту, на различных неподвижных фазах (в том числе
аминофазе, обращенных фазах С-8 и С-2). На колонках с аминофазой была
разделена смесь рибофлавина, пиридоксина, аскорбиновой и фолиевой кислот
и тиамина (элюент - смесь ацетонитрил/1 мМ Na2HP04, pH 3, 80:20). На
колонке с фазой С-8 разделить аскорбиновую и фолиевую кислоты не удалось
(градиентное элюирование от 1% карбоната аммония в воде до метанола,
4%/мин). В то же время на колонке с фазой С-2 были разделены ниацин,
пиридок-син, тиамин, рибофлавин, аскорбиновая и фолиевая кислоты (указаны
в порядке элюирования при градиентном элюировании от 5 до 60% метанола в
0,5%-ном водном растворе гекса-децилтриметиламмонийбромида, 3,8%/мин).
Растворы для внутривенных инъекций, помимо аминокислот и углеводов
(ксилита, инозита, сорбита) могут содержать водорастворимые витамины (В2,
В6, С, ниацинамид). Автор работы [101] разделил эти компоненты на
аминофазе, осуществляя их
604 Глава 12
элюирование смесью 10 мМ КН2Р04 (pH 4,3)/ацетонитрил в ступенчатом
градиентном режиме.
Для определения содержания аскорбиновой кислоты в поливитаминных
продуктах и некоторых пищевых продуктах, например томатном соке, авторы
работы [128] применили ион-парную хроматографию на обращенной фазе ц-
бондапак Ci8, элюен-том служил 1 мМ раствор формиата тридециламмоиия в
смеси 50% метанола/Н20. Следует отметить, что к настоящему времени
известно не так много публикаций, посвященных исследованиям аскорбиновой
кислоты в биологических пробах, но наличие различных доступных систем для
специфического обнаружения, например электрохимических детекторов,
позволяет предположить, что число таких работ в будущем возрастет.
Авторы работы [129] провели хроматографический анализ образцов мочи на
колонке с ц-бондапаком С]8 при элюировании 0,8%-ной метафосфориой
кислотой с тем, чтобы изучить роль абсорбции аскорбиновой кислоты после
перорального или внутривенного введения доз витамина С, превышающих 500
мг. В работе [130] описано определение аскорбиновой и дегидроаскор-
биновой кислот в различных биологических пробах путем разделения на
колонке с аминофазой при элюировании смесью 2,5 мМ КН2Р04/ацетонитрил
(50:50) и обнаружении при помощи УФ-детектора. Преимущество применения
электрохимических методов обнаружения аскорбиновой кислоты показано в
работе [131], авторы которой исследовали ее содержание в тканях мозга при
помощи хроматографии на сильном анионообмен-нике и элюировании 10 мМ
№НгР04. Авторы работы [132] расширили область применения
электрохимического обнаружения аскорбиновой кислоты: они прибегли к этому
способу обнаружения аскорбиновой кислоты в различных продуктах детского
питания, фруктовых соках, искусственных заменителях соков, фруктах,
злаках, молочных продуктах, поливитаминных препаратах, моче и т. д. (рис.
12.13). Эти авторы использовали амперометрический детектор с электродом
на основе угольной пасты (применяемый в ТСХ), а хроматографирование
