Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
Активностью витамина В6 обладают шесть соединений пиридок-синовой группы
- пиридоксол, пиридоксаль, пиридоксамин и соответствующие им фосфаты
(рис. 12.11); наиболее широкое применение в качестве лекарственной формы
нашел пиридоксол.
Многие из ранних методов определения витамина В6 в пищевых продуктах
и биологических жидкостях трудоемки, дорогостоящи и недостаточно точны
[106-109J. В то же время методы анализа, основанные на применении ВЭЖХ,
требуют мало времени и отличаются точностью и селективностью. В настоя-
СНоОН
сно
CH2NH2
Пиридоксол
Пиридоксаль
Пиридоксамин
Рис. 12.11. Структура некоторых соединений группы витамина В6.
Витамины 601
щее время хроматографические методы позволяют определять все витамины
группы В6 при концентрациях, соответствующих их содержанию в плазме крови
[ПО]. При групповом разделении витаминов В6 или водорастворимых витаминов
чаще всего осуществляется определение самого пиридоксола, поскольку
именно с этой целью и анализируются фармацевтические препараты. Тем не
менее фармакологические исследования и изучение метаболизма делают
необходимым и определение различных отдельных соединений, входящих в эту
группу. В табл. 12.10 приведен краткий обзор хроматографических методов,
используемых для разделения различных соединений группы В6. Другие
методы, в частности методы группового разделения витаминов В, рассмотрены
в работах [84, 85, 87-89].
12.2.4. Витамин С (аскорбиновая кислота)
Классические методы анализа витамина С - это титрование 2,6-
дихлорфенолиндефенолом [116], микрофлуориметрия [117] и колориметрия 2,4-
динитрофенилгидразоновых производных
? I НО ОН
""ОН i
9 он I но-сн,-с о^°
I
н-с-
I Н
но-с-н
СН2ОН
Рис. 12.12. Структура аскорбиновой кислоты.
дегидроаскорбиновой кислоты [118]. Применяются также и другие методы,
например электрохимические [119, 120], турбиди-метрические [121],
газохроматографические [122]. Большинство из них трудоемки и имеют
ограниченное применение, обусловленное присутствием (или отсутствием) в
пробе ряда мешающих определению соединений. Именно это обстоятельство и
стимулировало разработку соответствующих методов ВЭЖХ, включая
ионообменную, ион-парную и обращенно-фазовую хроматографию.
Определение аскорбиновой кислоты осложняет присутствие в изучаемой
пробе таких соединений, как, например, дегидро-аскорбиновая кислота
[126]. Поскольку эта кислота обладает биологической активностью, но очень
слабо поглощает, то при проведении исследований in vivo ее следует
учитывать, а при определении аскорбатов в пищевых продуктах или фармацев-
Таблица 12.10. Применение ВЭЖХ для исследований пиридоксина, пиридоксаля
и пиридоксамина
Исследуемые соединения а Неподвижная Элюент
Применение Лите
фаза
ратура
Пиридоксамнифосфат, пиридок!самин, Аминекс А-25 0,4 М NaCl, 10 мМ
глицин, 5 мМ Таблетки и плазма кро 110
пирндоксолфосфат, пиридоксол, семикарбазид, pH 10
(NaOH) ви
пирндоксальфосфат, пиридоксаль
Пиридоксаминфосфат, пиридоксамии, Аминекс А-25 0,4 м NaCl, 10 мМ
глицнн, pH 10--- Поливитаминные препа 111
пирндоксолфосфат, пирндоксол, 2,5 (ступенчатый
градиент) раты
3-гндроксипиридин, пиридоксаль,
пиридоксииовая кислота
Пиридоксаль, пнридоксамин С-18 67 мМ КН2Р04, pH 2,6
(Н3Р04) Плазма крови, моча, 112
фармакокинетика
Пирндоксамин, пиридоксаль, пири С-18 33 мМ КН2РО<. pH 2,2
(Н3Р04)/ Экстракты молока 113
доксол ацетонитрил (99 : 1)
Пиридоксаль, пиридоксол, пиридокс- Катиоиообмен- 0,7 М аммоний-формиатный
буфер Стандартные растворы 114
амин ник (аминекс (изократнческий режим)
или ам-
А-5) моний-формиатиый буфер
от 10 мМ
(pH 6,5) до 1 М (pH 6,6)
(гра
диентный режим)
Пиридоксаль, пиридоксол, пнридокс- С-18 (ИПХ) Г ептансульфонат/2-
