Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 25

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 296 >> Следующая

большим соль-ватирующим эффектом, чем вода, по отношению к катионам,
Дополнительные возможности для оптимизации условий разделения при помощи
ИПХ обеспечивает использование элюентов на основе тройных смесей.
В обращенно-фазовой хроматографии уравновешивание ко лонки элюентом и
противоионом часто требует много времени, особенно если противоион имеет
большую алкильную группу и используется в большой концентрации.
Уменьшение концентрации такого противоиона позволяет снизить время,
необходимое для достижения состояния равновесия (примерно до 1 ч). При
проведении разделения в режиме обращенно-фазовой ион-парной хроматографии
трудно, а часто и невозможно полностью регенерировать колонку, поскольку
четвертичные аммониевые соединения способны необратимо адсорбироваться на
поверхности сорбента вследствие взаимодействия с немодифицированны-ми
силанольными группами.
ИПХ представляет собой прекрасный метод аналитического разделения
способных к диссоциации соединений. Он дает минимальное размывание
полосы, эффективность колонки соответствует достигаемой при разделении
нейтральных соединений. Предсказать хроматографическое удерживание
соединений можно исходя из простого ионного механизма. Пики ионоген-
Хроматографическая колонка 63
ных соединений легко сместить в такую область, в которой отсутствуют пики
нейтральных соединений. Однако возможности использования ИПХ в
препаративных целях ограничены в связи с тем, что противоионы,
присутствие которых в элюенте обязательно, очень трудно удалить и из
элюента, и из полученных фракций пробы.
2.2.5.2. Другие виды вторичных равновесий. Явление ком-
плексообразования в подвижной и (или) на неподвижной фазах используют для
увеличения селективности разделения. Например, нитрат серебра влияет на
селективность и изменяет удерживание ненасыщенных углеводородов,
образующих с ним полярные комплексы, элюирующиеся гораздо раньше, чем
исходные соединения [73]. Удерживание ненасыщенных углеводородов
увеличивается, если нитрат серебра нанесен на неподвижную фазу, например
силикагель или катионообменник [74].
Добавки хелатов металлов также увеличивают селективность разделения.
Хелаты на основе триаминов и ионов цинка или кадмия увеличивают
селективность ион-парного разделения ароматических кислот [68]. При
помощи хиральных тридентатных аминов можно осуществить разделение
дансилпроизводных энантиомерных аминокислот [75]. В работе [76] описаны
системы для хирального разделения аминокислот на основе хелатов ионов
металлов. В данном случае оптически чистые аминокислоты выполняют в
присутствии ионов меди(II) роль добавок.
2.2.6. Ионообменная хроматография
Основная область применения ИОХ в биохимическом анализе - это разделение
аминокислот. Аминокислоты адсорбируются на катионообменнике (полимерная
матрица с сульфогруппами) и элюируются при изменении pH и ионной силы
водного элюента. Классический тип ионообменников представляет собой
набухший гель, механическая прочность которого ограничена, что затрудняет
его широкое применение в ВЭЖХ. Механическая прочность неподвижных фаз
увеличивается в результате их сшивки, которая, однако, сопровождается
уменьшением среднего диаметра пор. В итоге диаметр пор у механически
прочных ионообменников может быть столь незначительным, что возможность
их применения в биохимическом анализе автоматически исключается [77].
Характерная особенность ионообменников этого типа - способность сжиматься
или набухать в соответствии с изменением pH или ионной силы элюента.
2.2.6.1. Свойства ионообменников на основе силикагеля.
Попытки получить ионообменники повышенной механической прочности
предпринимались еще на ранних этапах развития
54
Глава 2
20,0
15,0
5,0
Ф a fr
2,0 3,0
Л А ^ Д ^ ^ S 5
4,0 5,0 6.0 7,0 8,0
Рис. 2.20. Удерживание азотистых оснований на кати-онообменнике при
разных pH. Неподвижная фаза: нухлеосил 10SA; элЮ-енг: фосфатный буфер
(ионная снла 1= =0,1 М); проба: 1 ~
аденин, 2- гуаннн. 3 - тимин. 4 - цнто-зин, 5 - урацил.
pH
ВЭЖХ. В этих целях использовали поверхностно-пористые сорбенты,
представляющие собой непроницаемые стеклянные частицы, покрытые тонким
пористым слоем ионообменника [78]. Очевидно, что емкость таких
ионообменников невелика [78]. В настоящее время распространение получили
ионообмен-ники на основе силикагеля с химически привитыми поверхностными
ионообменными группами. Катионообменники имеют фенил- или
алкилсульфогруппы, анионообменники -¦ амино-(слабые) или четвертичные
аммониевые группы (соответственно сильные анионообменники). Хотя удельная
обменная емкость (ммоль/г) ионообменников на основе силикагеля в 4 и
более раз уступает таковой для ионообменников на основе полистирола,
вследствие более высокой плотности упаковки колонок с силикагелем
обменная емкость (в расчете на 1 мл колонки) .•колонок с силикагелем
Предыдущая << 1 .. 19 20 21 22 23 24 < 25 > 26 27 28 29 30 31 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed