Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
Стероидные гормоны 561
где У/?(А)-абсолютный объем удерживания соединения А, У"(Т)-абсолютный
объем удерживания тестостерона.
Величину относительного удерживания logy"(A)T пробы А можно найти
непосредственно путем сравнения с аналогичным параметром для
тестостерона, если провести их разделение на корасиле II при элюировании
смесью этилацетат/м-гексан (1 :4). Если используется смесь тех же
растворителей, но в иных пропорциях (например, этилацетат/м-гексан
(1:9)), величину относительного удерживания пробы Б можно вычислить из
значения этого параметра для соединения 30:
log[V*(B)/MT)] =
_ J0g Vr (B)/Vr (30) [этидацетат/н-гексан (1:9)]
V# (30)/У^ (T) [этилацетат/ч-гексан (1 : 4)]
Если соотношение компонентов смеси этилацетат/н-гексан изменится,
например, до 1 : 19, Для нахождения величины удерживания пробы В
потребуется повторное экстраполирование пробы 4:
iog[MB)/iMT)] =
jQg VR (В)/Vц (4) [этилацетат/ч-гексан (1: 19)] ^
Vr (4)/Vц (30) [этилацетат/н-гексан (1:9)]
X--------------------1-------------------(7)
Vr (30)/l/R (Т) [этилацетат/ч-гексан (1 : 4)]
Для двух соединений Р и Q, имеющих аналогичную структуру и
отличающихся только функциональными группами, различие в относительных
объемах удерживания A log VR составит
A log V" = log IMQ)-log IMP) = log*(Q)-log*(P) (8)
где ^"(Q), F"(P)-объемы удерживания проб P и Q, k(Q). &(P) -коэффициенты
емкости проб Q и Р.
Разность Alog VR можно также рассчитать из относительных объемов
удерживания log Vr/Vr (Т), выбрав тестостерон в качестве стандарта.
В табл. 11.14 приведены объемы удерживания стероидов и одной
адсорбционной и двух обращенно-фазовых системах.
Для нахождения зависимости между характеристиками элюирования и
химической структурой стероидов было проведено сравнение относительных
объемов удерживания пар стероидов, имеющих аналогичную основную структуру
и отличающихся на одну функциональную группу, для двух обращенно-фазовых
и трех полярно-фазовых систем (рис. 11.27).
Исходя из этих данных, можно сделать следующие выводы.
а. Порядок элюирования зависит в основном от неподвижной, а не от
подвижной фазы.
3S-1489
Таблица 11.14. Объемы удерживания лекарственных препаратов стероидного
ряда [65]
Колонка: 600X2,3 мм (внутр. диаметр); обнаружение: по поглощению при 254
нм или рефрактометрическое; неподвижная фаза; Л-Г- корасил II, Д-М -
боидапак С^корасил; элюеит: Л-/*- "-гексан/этилацетат (19:1,9:1,4:1 и 3 :
2 по объему), Д-Ж - метанол/вода (2 ; 3, 1 : 1, 4 : 1 по объему), 3-М -
ацетонитрил/вода (1 : 9, I : 4, 3 : 7, 2 : 3 и 1 : 1 по объему)
Стероид А Б В Г Стероид
Д Е Ж 3 и К л м
3,17§-Дипропионилокси- 0,85 0,26 11р,16а,17а,21-Тетра-
0,60 1,50 0,60
эстра-1.3.5 (10) -триен гидроксн-9а-фтор-
прегна-1,4-диен-3,20-
дион
З-Метокси-17а-этинил- 2,79 0,78 Эстра-1,3,5 (10) -триен-
1,40 4,65 1,65
эстра-1,3,5 (10) -триен- 3,16а,17[$-трнол (эстри-
17р-ол ол)
17р-Валерилоксиэстра- 2,79 0,82 17а,21-Дигидроксипрегн-
2,00а 7,10а 2,70а
1,3,5 (10) -триен-3-ол 4-ен-3,11,20-трион
6,83 1,87 (кортизон)
17{5-Пропионилокси-4- 11р,17а,21-Тригидроксн- 2,20
6,30 2,20
хлорандрост-4-ен-З-он прегна-1,4-диен-3,20-
7,303 2,00(r) дион (предпизолон)
З-Бензоилокси-16а, 17{5 0,39 11 ($, 17а, 21 -Три гидрокси - 2,30
6,80 2,30
диацетоксиэстра- прегн-4-ен-3,20-дион
1,3,5 (10) -триен 8,95 2,31 0,55 (гидрокортизон)
17[5-Ацетокси-4-хлор- 14а,17{1-Днгидроксианд- 3,10
3,50
андрост-4-ен-З-он рост-4-ен-З-он
17а-Этилэстра-1,3,5 (10) - 9,98 2,77 0,69 бр,17р-Дигидроксианд-
3,40 2,90
триен-3,17[5-диол рост-4-ен-З-он
17[5-Пропионилоксианд- 10,83 3,00 0,80 11Р, 17а,21 -Тригидрокси-
