Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
Преги-5-ен-Зр,20а-диол _ 15 21
Прегн-5-ен-Зр,20р-диол --- 15 27,5
5а-Прегиаи-За,20а-диол --- 15 35
5а-Прегнан-За,20[5-днол --- 16 44
5а-Прегнаи-ЗР,20а-диол --- 15 29
5а-Прегнан-Зр,20р-днол _ 13 38
5[5-Прегнан-За,20а-диол --- 26 29
5р-Прегнан-Зос,20р-диол --- 22 38
5р-Прегнан-Зр,20а-диол --- 14,5 27
5&-Прегнан-Зр,20р-диол 14,5 38
стерона) 5а-эпимера методом адсорбционной хроматографии.
б. Для разделения четырех дионов различной структуры можно
использовать адсорбционную, ио не распределительную хроматографию.
в. Для разделения 20-эпимеров моногидроксикетонов лучше всего
применять обращенно-фазовую распределительную хроматографию.
г. Биохимически важное отделение прогестерона от прегне-нолона и
33-гидрокси-5а-прегнан-20-она можно осуществить ме-
550
Глава 11
СН,
с=о
он
сн3
с=о
СИ,
СИОН
Г3
с=о
Рис. 11.5. Структуры некоторых про-гестинов.
1 - 17а-гидроксипро-гестерон; 2 - прогестерон; 3 - прегнево-лон; 4 -
прег-4-ен-20р-ол-3-он.
Л
100
ь.%
50
20
Рис. 11.16. Разделение аидростен-диона (/), тестостерона (2), 17а-гнд-
роксипрогестерона (3) и прогестерова (4) методом ВЭЖХ [411.
Колонка: 250X4.6 мм (внутр.
днаметр); неподвижная фаза: партисил PXS 10 ODS-2; элюент: А -
вода/тетрагидрофуран (99:1); Б - вода/тетрагидрофураи (1:1), 50% Б н
течение 9 мни, последующее унеличенне концентрации Б со скоростью 10%
Б/мин в течение 5 мии, далее до 100% В в течение 1 мнн; объемная
скорость: 2 мл/мни; обнаружение: при 240 нм; проба: 24 мкг каждого
стероида в б мкл растворителя.
1мин
тодом обращенно-фазовой хроматографии, но при использовании адсорбционной
хроматографии указанное разделение затруднено.
д. Разделение диолов - наиболее полярных производных
Стероидные гормоны 551
прогестерона - возможно только при помощи адсорбционной хроматографии.
Как было недавно показано на примере отделения прогестерона от его
метаболитов 17а-гидроксипрогестерона и тестостерона (рис. 11.16),
градиентное элюирование увеличивает разрешающую способность ВЭЖХ при
разделении прогестинов. Наиболее чувствительный метод определения
прогестинов - это ВЭЖХ меченных радиоактивными изотопами прогестерона и
его производных [40].
11.5. Кортикостероиды
Кортикостероиды, продуцируемые в коре надпочечников (adrenal cortex), в
соответствии с их биологической активностью делятся на минералокортикоиды
(альдостерон и 11-дезоксикорти-
сн,он
с=о
¦он
сн,он
I
с=о
сн,он
I
с=о
сн,он
I
с=о
сн2он
с=о
сн2он
с=о
¦он
Рис. 11.17. Структуры некоторых кортикостероидов.
1 - кортизон; 2 - кортизол; 3 - альдостерон; 4 - кортикостерон; 5-11-
дегидрокортико-стерон; 6 - 11*дезоксикортикостерон; 7 - 11-
дезокснкортизол; 8 - 6-Р-гидроксикортизол.
Таблица 11.12. Время удерживания стероидов, включая кортикостероиды,
при разделении методом ВЭЖХ [63]
Колонка: 250X2,1 мм (внутр. диаметр): неподвижная фаза: зорбакс ODS;
режим элюирования: градиентный (У=Хг); элюент: А - от смеси метанол/вода
(4 : 6) до 100%-ного метанола (50 мин), Б - от смеси ацетоннтоил/вода
(8:25) до 100%-ного ацетоннтрила (50 мин), В -от смеси диоксан/вода (1:4)
до 100%-ного дноксаиа (50 мни); объемная скорость: от 0.38 до 0,67 (Л),
0,80 (5) и 0,34 мл/мин (В); обнаружение: по поглощению при 240 (А, Б) и
254 км (В)
Стеронд
tмнн
6J5Tидроксикортизол (бр, 11 р, 17а,21 -тетрагидрокси-прегн-4-еи-3,20-
трион)
11-Дегидроальдостерон (21-гидроксипрегн-4-ен-18-аль-
3.20-трион)
17-Изоальдостерон (11р,21-дигидрокси-17р-прегн-4-ен-18-аль-3,20-
дион)
18-Гидрокси-11-дегидрокортнкостерон (18,21-дигидро-ксипрегн-4-ен-
3,11,20-трион)
Преднизон (17а,21-дигидроксипрегна-1,4-диен-3,11,20-трион)
Альдостерон (11 [5,21 -дигидроксипрегн-4-ен-18-аль-3,20-
дион)
Эстрнол (эстра-1,3,5(10) -триен-3,16а, 17^-триол)
Кортизон (17а,21 -дигидроксипрегн-4-еи-3,11,20-трион)
19-Гидроксиандростеидион (19-гидроксиандрост-4-ен-
3.17-дион)
7а-Гидрокситестостерои (7а,17р-дигидроксиандрост-4-еи-3-он)
18-Гидроксикортикостерон (11 {1,18,21 -тригидроксипрегн-4-ен-3,20-
дион)
Преднизолон (11 j5,17а,21 -тригидроксипрегна- 1,4-диен-
3.20-дион)
Кортизол (11 р, 17а,21 -тригидроксипрегн-4-ен-3,20-дион) Адреностерон
