Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
1,8 0,7 1,28 1,12 0,86
16-{14)-Глюкуронид эстриола 3,0 3,6 3,5 4,3 2,7 2,7 1,8 2,4
1,8 0,7 1,28 1,12 0,86
P-D-Глюкуронид эстрона 4,0 5,2 5,6 6,1 4,5 11,9 2,0 4,2
5,2 3,3 3,0 2,7 2,0
З-р-Б-Глюкуроиид эстрадиола-17р 4,5 5,7 6,4 8,2 3,5 5,3 2,8 3,4
4,5 1,5 2,1 1,89 1,47
17-[5-0-Глюкуронид эстрадиола-17[5 6,6 7,9 8,1 10,6 5,0 7,0 3,7 4,4
4,75 1,5 2,5 2,2 1,61
P-D-Глюкуронид тестостерона 9,0 10,4 9,5 7,9 6,8 16,7 2,6 6,1
8,1 4,2 4,0 3,5 2,7
3-Сульфат эстриола 2,3 2,6 2,2 2,3 2,5 2,0 1,2 2,1
1,25 0,4 1,32 1,14 0,90
17-Сульфат эстриола 5,8 6,9 6,0 7,3 6,3 5,8 3,4 5,0
3,1 1,1 _ 3,2 2,4
3-Сульфат эквиленина 9,4 12,0 10,7 11,9 16,9 19,2 4,5 11,9
8,1 5,1
3-Сульфат !7а-дигидроэквилеиииа 9,5 12,5 12,1 14,9 13,1 12,0 6,2 9,9
5,8 2,4
3-Сульфат эквилина 10,7 13,7 12,1 12,3 18,3 20,6 4,7 12,6
9,7 5,5
3-Сульфат эстроиа 11,8 15,4 13,5 15,5 21,4 38 5,5 15,2
12,5 7,2
3-Сульфат эстрадиола-17& 12,4 16,9 15,5 18,3 16,6 16,1 8,0 12,0
8,1 3,3
17-Сульфат эстрадиола-17р 13,7 18,6 17,3 19,9 15,6 15,7 8,9 10,8
7,6 2,2
3-Сульфат эстрадиола-17а 14,7 20,2 18,6 21,6 18,0 25,3 9,4 13,7
9,9 3,85
548 Глава 11
t.MHH -- г.мин---->
Рис. 11.14. Хроматограммы конъюгатов эстрогенов, полученные в присутствии
различных модификаторов подвижной фазы [37].
Колонка: 150X3 мм (внутр. диаметр); температура: 70 °С; неподвижная фаза:
лнхросорб RP-2 (5 мкм); элюент: 7% бутанолп+93% 0,06 М фосфатп, pH 8,0
(а) и 15% пцетонит-рила + 85% 0,05 М фосфата, pH 8,0 (б); обнаружение:
при 229 им.
1 - 3-|5-0-глюкуронид эстриолп; 2 - 3-сульфат эстрнола; 3 - 17-|5-Е)-
глюкуронид эстриола; 4 - p-D-глюкуронид тестостерона; 5 - 17-|5-0-
глюкуроиид эстрадиола-170; 6 - 3-сульфат экйнленнна; 7 - 3-сульфат 17а-
дигндроэквнленнна; 8 - 3-сульфат эстрона; 9 - 3-|5-D-глкжуроннд
эстрадиолп-17|5,
коэффициенты селективности конъюгатов эстрогенов при разделении на
колонках с неполярными, химически связанными неподвижными фазами на
основе силикагеля может быть весьма значительным.
11.4. Прогестины
К прогестинам относятся С21-стероидные гормоны, которые вырабатываются
как в коре надпочечников (adrenal cortex) мужских и женских особей
млекопитающих, так и в желтом теле (corpus luteum) во время
менструального цикла. На рис. 11.15 приведены структурные формулы
некоторых прогестинов.
Используя адсорбционную и обращенно-фазовую ВЭЖХ в различных
сочетаниях, можно проводить разделение любых, в том числе и весьма
сложных смесей прогестерона и его производных [39]. В табл. 11.11 указано
время удерживания производных прогестерона, разделенных методами
адсорбционной и обращенно-фазовой ВЭЖХ.
Основываясь на данных табл. 11.11, можно сделать следующие выводы:
а. Более полярные 5[5-прегнан-3,20-дион и прегнан-5-ен-3,20-дион
можно отделить от менее полярного (относительно проге-
Стероидные гормоны 549
Таблица 11.11. Время удерживания производных прогестерона при
разделении методом ВЭЖХ [39]
Колонка: А, Б - 600X 2 мм (внутр. диаметр), В - 500X 4 мм (внугр.
диаметр); неподвиж-ная фаза: А, Б - партиснл 5 (5 мкм), В- зорбакс BP-ODS
(7-8 мкм); элюеит: А - 0,25% этанола в дихлорметане, Б -
гексан/изопропанол (97:3), В - ацетоиитрил/вода (6:4); объемная скорость;
1 мл/миН; обнаружение: А - по поглощению при 280 нм, Б, В -
рефрактометрическое; проба; А, Б - от 17 до 135 мкг каждого стероида в
дихлорметане (Л) нли в элюенте (Б), В - 85 мкг каждого стероида в элюенте
Соединение А мнь в
Дионы
Прегн-4-ен-3,20-дион (прогестерон) 44 --- 40
Прегн-5-ен-3,20-дион 51 --- 52
5а-Прегнан-3,20-дион 18 --- 62
5р-Прегнан-3,20-дион 22 --- 51
Моногидроксикетоны
Зр-Гидроксипрегн-5-ен-20-дион (прегненолон) 37 --- 36
20а-Гидроксипрегн-4-ен-3-он --- 18 25
20р-Гн ароксипрегн-4-ен-З-он --- 17 35
За-Г ндрокси-5а-прегнан-20-он 32 --- 51
За-Гидроксн-5(1-прегиан-20-он 61 --- 41
3[5-Гндрокси-5а-прегнан-20-сгг 39 --- 50
Зр-Гидрокси-5В-прегнан-20-он 27 --- 45
20а-Г идрокси-5а-прегиан-3-он 53 --- 43
20а-Г идрокси-б^-прегиан-З-ои 100 --- 38
20[5-Г идрокси-5а-прегнан-3-он 53 •--- 59
20[5-Г идрокси-б^-прегнан-З-он 95 --- 56
Диолы
