Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 19

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 13 14 15 16 17 18 < 19 > 20 21 22 23 24 25 .. 296 >> Следующая

различных колонок, заполненных силикагелем, относительные величины
удерживания следует нормализовать. Это же правило справедливо и для
колонок с привитыми фазами. Величины коэффициентов емкости привитых фаз
коррелируют не с процентным (по массе) содержанием привитых групп (по
углероду), а с количеством углерода, приходящегося на единицу объема
колонки. Поэтому необходимо знать плотность упаковки колонки. Эту
величину может сообщить только изготовитель колонки или же ее
устанавливают после удаления неподвижной фазы из колонки. Плотность
заполнения колонок с привитыми фазами больше, чем колонок с
немодифицирован-ным силикагелем, например плотность заполнения колонки
лихросорбом Si 100 составляет около 0,34 г/мл, а колонки с обращенной
фазой Cie (18 масс. % С) 0,47 г/мл.
Многие типы обращенных фаз выпускают промышленными методами.
Наибольшее распространение получила обращенная фаза Cis: ее используют
для разделения как неполярных (например, эфиров жирных кислот), так и
водорастворимых соединений. Второе место в списке селективных обращенных
фаз занимает, по-видимому, фаза С8. В ряде случаев разделение проводят на
короткоцепочечных привитых неподвижных фазах, приготовленных на основе
диметил- или триметилхлорсиланов. На таких фазах прекрасно происходит
разделение больших молекул, время удерживания которых на фазах С8 и С^
очень велико.
Номенклатура обращенных фаз к настоящему моменту еще не устоялась.
Обычно название дается по самой большой алкильной группе, и одна или две
метальные группы, введенные дополнительно, например, с октадецильной
группой, не учитываются. Все такие фазы называют Cis- Соответственно
обращенные фазы с привитыми диметил- или триметилсилильными группами
следует называть метальными, или Q. Однако некоторые фирмы-поставщики
называют их С2 или Сз.
Кроме фаз с привитыми алкильными группами в обращенно-фазовой
хроматографии применяются фазы с фенильными или алкилнитрильными
группами. Специфическая селективность, проявляемая этими фазами особенно
при элюировании неполярными не содержащими воду элюентами, может быть
обусловлена различием в степени заполнения поверхности. Очень высокая
селективность нитрильных фаз, проявляемая в условиях газовой
хроматографии, не нашла, однако, убедительного подтверждения в жидкостной
хроматографии.
Хроматографическая колонка 49'
2.2.4.2. Влияние состава элюента. Для обращенно-фазовой
хроматографии характерен экспоненциальный рост коэффициента емкости с
увеличением содержания воды в элюенте. Максимальное удерживание
наблюдается при элюировании чистой водой. С целью уменьшения удерживания
к воде добавляют смешивающиеся с ней органические растворители - метанол,
ацетонитрил, высшие спирты, диоксан, тетрагидрофуран. Элюирующая
способность в приведенном ряду возрастает (она определяется удерживанием
данного растворителя на обращенной фазе при элюировании водой) [52]. К
уменьшению удерживания приводит также добавление в элюент уксусной
кислоты.
Поскольку органические соединения прочнее всего сорбируются из водных
растворов, обращенную фазу применяют для концентрирования содержащихся в
воде микропримесей органических соединений [53]. После такого обогащения
пробы микропримесями проводят их ступенчатое или программируемое
элюирование при градиентном увеличении элюирующей способности
растворителя. Обогащение пробы и разделение целесообразно проводить на
различных колонках, првчем после концентрирования на аналитическую
колонку следует наносить только интересующие исследователя фракции путем
применения техники переключения.
Выбор растворителя - метанола, ацетонитрила, пропанола или
тетрагидрофурана - определяется растворимостью в нем и некоторыми
специфическими особенностями элюеита. Коэффициент емкости для бензола
имеет одинаковые значения при: разделении на обращенной фазе С18 и
элюировании смесью вода/метанол (1:1), вода/ацетонитрил (7:3) или
вода/ТГФ (3:1) (все соотношения объемные). Селективность при разделении
различных полярных производных бензола существенно отличается [54, 55].
Удерживание ароматических аминов, фенолов и карбоновых кислот при
элюировании смесью вода/ТГФ значительно выше, чем при элюировании
метанольной или аце-тонитрильной смесью. Аналогичным образом меняется
селективность и для других органических соединений, имеющих полярные
функциональные группы.
Для смесей вода/ацетонитрил или вода/метанол характерна приблизительно
линейная зависимость log& от процентного содержания органического
компонента. Для других водно-органических элюентов наблюдается отклонение
от линейной зависимости. Для водно-метанольных систем с увеличением
содержания метанола коэффициент емкости k уменьшается в 103- 104 раз. Это
означает, что небольшое изменение состава элюента существенно изменяет k.
С увеличением содержания органического компонента на 10% величина k
уменьшается, как правило, вдвое. Следовательно, смеси элюентов необходимо
Предыдущая << 1 .. 13 14 15 16 17 18 < 19 > 20 21 22 23 24 25 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed