Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
производных сахаров - анионообменная хроматография. В некоторых случаях
элюирование боратным буфером обеспечивает дополнительное увеличение
селективности.
8.7.1. Уроновые кислоты
Большинство хроматографических методов разделения уроновых кислот,
описанных в литературе, предусматривает использование низких давлений.
Например, галакто- и глюкуроновая кислоты были разделены на дауэксе-1 при
элюировании 0,15 М уксусной кислотой [40].
Авторы работы [41] разделили смесь, состоящую более чем из 10
компонентов, на ионообменной смоле с частицами небольшого размера. При
хроматографировании на полистирол-диви-нилбензольной смоле со степенью
сшивки 8% и элюировании 0,6-1,0 М калий-боратным буфером (pH 8-10)
уроиовые кислоты элюируются после нейтральных сахаров [42].
8.7.2. Альдоиовые, сахарные и сахариновые кислоты
Наиболее эффективное разделение углеводов этого класса осуществляется на
сильноосновных ионообменных смолах в борат-ной форме [20]. При помощи
этого метода удается разделить кислоты с одинаковым значением р/С;
разделение осуществляется в соответствии с их способностью образовывать
комплексы с борной кислотой.
Из "формозы" - смеси сахаров, полученной в результате реакции [43],
были выделены и обнаружены несколько альдоновых и сахариновых кислот, а
также нейтральные сахара и полиолы (см. рис. 8.8). Порядок элюирования,
если не учитывать величины ptf, опять-таки соответствует правилу
Боесекена.
На ионообменной смоле была с успехом разделена также смесь, состоящая
из аскорбиновой кислоты, нейтральных сахаров, уроновых и изоаскорбиновых
кислот [44, 45].
8.8. Фосфаты сахаров
Наиболее важным методом анализа и выделения из природных продуктов
производных сахарных кислот этого класса является ионообменная
хроматография. Однако стабильность фосфатов
448 Глава 8
сахаров невелика, особенно в кислой или щелочной среде. Если же не
учитывать это, то хроматографическое поведение фосфатов сахаров
аналогично хроматографическому поведению других ¦сахарных кислот.
8.9. Гликозиды, простые и сложные эфиры, ацетали
Хроматографическое поведение гликозидов с простыми аглико-нами аналогично
хроматографическому поведению свободных моносахаридов и полиолов.
Разделение по механизму распределительной хроматографии проводится на
неподвижных фазах на основе силикагеля или полистирол-дивинилбензола (см.
разд. 8.4.1 и 8.4.2). Однако разделение углеводов этих классов - и
свободных сахаров и полиолов на ионообменных смолах в бо-ратной форме -
существенно различается. Потеря активной аномерной гидроксильной группы
приводит к снижению прочности комплексов этих производных с борной
кислотой и соответственно к уменьшению коэффициента емкости [10].
Объемные и неполярные агликоны также могут решающим образом влиять на
хроматографические свойства углеводов. Разделение углеводов этого класса
может быть осуществлено при помощи обращенно-фазовой или гель-проникающей
хромато-трафии.
Хроматографическое поведение ацеталей и простых или сложных эфиров
углеводов, отличающихся по числу гликозид-яых звеньев, не совпадает с
поведением свободных олигосахаридов. Большинство частично или полностью
замещенных производных углеводов неполярны или слабо полярны. Поэтому
ацильные, бензоильные, бензильные, метилированные изопро-пилиденовые или
бензилиденовые производные следует разделять при помощи жидко-
твердофазной хроматографии, например на силикагеле, или обращенно-фазовой
хроматографии.
5.10. Полисахариды
Единого метода, который можно было бы рекомендовать для
хроматографического разделения полисахаридов, их очистки и определения
аналитических характеристик в настоящее время, по-видимому, не
существует. Нейтральные полисахариды обычно разделяют при помощи гель-
проникающей хроматографии. В некоторых случаях проводят разделение
боратных комплексов полисахаридов при помощи ионообменной хроматографии;
селективность разделения при этом повышается. К сожалению, в качестве
неподвижных фаз для гель-проникающей хромато-
Углеводы 449
графии могут использоваться лишь очень немногие материалы. Поэтому
большинство методик разделения полисахаридов основано на хроматографии
низкого давления. Разделение кислых и основных полисахаридов проводят на
ионообменных смолах.
Устойчивые к высокому давлению неподвижные фазы имеют относительно
небольшой предел эксклюзии (103-105 Д), что не позволяет разделять на них
полисахариды с большой молекулярной массой.
Литература
1. Cramer F. Angew. Chem., 62, 73 (1950).
2. Stahl ?., Kaltenbach U. J. Chromatogr., 5, 351 (1961).
3. Whistler R. L" Durso D. F. J. Am. Chem. Soc" 72, 677 (1950).
4. McNeely II. W., Binley W. W., Wolfrom M. L. J. Am. Chem.
Soc., 67, 527
(1945).
5. Hough L., Jones J. K. N., Wadman W. A. J. Chem. Soc., 2511, 1949.
6. Arwidi B., Samuelson O. Svensk. Kem. Tidskr., 722, 84 (1965).
7. Roseman S., Abeles R. H., Dorman A. Arch. Biochem. Biophys.,
