Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 182

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 176 177 178 179 180 181 < 182 > 183 184 185 186 187 188 .. 296 >> Следующая

остальные условия см. в подписи к рис. 8.8.
Рис. 8.10. Разделение олигосахаридов кукурузного сиропа.
Колонка: 30X0,65 см; неподвижная фаза: интерэк-шнон ЛС 6020 углевод;
элюент: вода; температура колонки: 90 °С; объемная скорость: 0,5 мл/мии;
детектор: рефрактометрический.
444
Глава 8
"3
Рис. 8.11. Разделение амииосахаров в присутствии аминокислот.
Колонка: 20X0,32 см; неподвижная фаза: сильнокислая ионообменная смола
ВТС
2710/7 мкм (Biotronik, ФРГ); элюент: цитрат натрия, от 0,1 до 1,0 М, pH
3,4-4,6; объемная скорость; 0,4 мл/мин; градиент температуры; 46-68 °С;
проба: по 5 нмоль каждого компонента.
несколько неподвижных фаз. По этой причине разделение углеводов при
помощи ГПХ проводят главным образом при низком давлении на
полиакриламидных гелях, сефарозе и т. д. На рис. 8.10 показано разделение
ряда мальтоз на неподвижной фазе на основе полистирола.
8.5. Аминосахара
Разделение свободных амииосахаров следует проводить при помощи
ионообменной хроматографии. Элюирование с кислотных ионообменных смол
осуществляется буферными растворами с кислотным значением pH или
разбавленными кислотами [39]. Часто для разделения амииосахаров
используются стандартные аминокислотные анализаторы с послеколоночной
модификацией нингидриновым реагентом. Если образец содержит смесь амино-
сахаров и аминокислот, то молярность и pH буфера-элюента необходимо
подбирать так, чтобы аминосахара элюировались после фенилаланина, но
перед аминокислотами, обладающими основными свойствами (рис. 8.11).
В литературе описаны примеры одновременного разделения смесей
нейтральных сахаров, амииосахаров и аминокислот [27]. Путем использования
хроматографических систем с небольшой предколонкой, заполненной
ионообменной смолой в Н+-форме, и автоматическим переключателем колонок
можно определять
t, мин
Рис. 8.12. Разделение смеси аминокислот, аминосахаров и нейтральных
сахаров [27].
Предколонка: 5X4 мм; неподвижная фаза: смола DC-8-9; колонка для
разделения аминокислот и аминосахаров: 25X0,4 см; иеподвиж-иая фаза: та
же; колонка для разделения нейтральных сахаров: 16X0,4 см; неподвижная
фаза: смола DA-X-8-8; объемная скорость: 0,24 мл/мин; давление: 80-110
бар; обнаружение: при 570 (иингидрин) или 420 им (орсин-сернокислотиый
метод); проба: по 2.05 имоль каждой аминокислоты и по 4,40 нмоль каждого
аминосахара и нейтрального сахара.
/ - аспартамовая кислота; 2 - треонии; 3- серни; 4 - глутаминовая
кислота; 5--пролин; 6 - глицин; 7 -аланин; 8 - цнстии; 9 - валин; 10-
метионин; // - неизвестное вещество; 12 - изолейцин; 13 - лейцин; 14 -
тирозин; 15 - фенилаланин; 16 - галактозамии; 17 - глюкозамин; /8 -лизин;
19 - аммоннй-ион; 20 - гистндии; 2/ - аргнннн; 22 - сахароза; 23 -
трегалоза; 24 - целлобноза; 25 - мальтоза; 26 - рамноза; 77 - лактоза; 28
- рнбоза; 29 - манноза; 30 - фруктоза; 31 - арабнноза; 32 - галактоза; 33
- ксилоза; 34 - глюкоза: 35 - гентиобиоза; 36 - мелнбиоза,
446 Глава 8
Гликоль -Глицерин Ксилит - Арзвит Сороит
без введения дополнительного внутреннего стандарта субмикро-граммовые
количества гликопротеинов (рис. 8.12).
В целях препаративного разделения целесообразно применять легколетучий
элюент, например, на основе пиридина н уксусной кислоты.
Аминосахара можно разделять и в виде их производных.
Хроматографическое поведение производных аминосахаров обусловлено
природой и числом содержащихся в них заместителей. Если аминогруппы
блокированы, как, например, в природных N-ацетилированных аминосахарах,
то свойства, присущие аминосахарам как основаниям, утрачиваются, и
ионообменная хроматография становится неприменимой. Вместе с тем, однако,
появляется возможность использовать весь арсенал хроматографических
методов, разработанных для разделения нейтральных сахаров.
8.6. Альдиты
Молекулы альдитов насыщены гидроксильными группами, поэтому условия их
разделения практически не отличаются от условий разделения нейтральных
сахаров. Наиболее широкое применение нашла жидко-жидкостная ионообменная
хроматография и особенно боратный метод, позволяющий добиться наибольшей
селективности разделения. Порядок элюирования строго соответствует
правилу Боесекена [31]: грамс-диолы элюируются перед цис-диолами. Влияние
терминальных диольных групп сказывается слабее. Например, пентиты
элюируются в следующем порядке: ксилит, арабинитж ликсит и рибит.
На рис. 8.13 приведен пример разделения альдитов на ионообменной смоле
в боратной форме (размер частиц 8 мкм, изо-кратический режим элюирования,
обнаружение при помощи периодатиого реагента).
Маннит
Колонка: 25X0,6 см; неподвижная фаза: основная ионообменная смола дуррум
DA-X-8-I1, 14 мкм; элюент: боратный буфер, 0,8 М, pH 9,4; обнаружение: с
использован нем послеколоночного модифицирования периодат-ацетилацетоном.
Рис. 8.13. Разделение полиолов.
О
Углеводы 447
8.7. Сахарные кислоты
Наиболее эффективный метод аналитического и препаративного разделения
альдоновых, уроновых, сахарных и сахариновых кислот и других кислых
Предыдущая << 1 .. 176 177 178 179 180 181 < 182 > 183 184 185 186 187 188 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed