Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
ароматических углеводородов на силикагелях с разной удельной
поверхностью.
На силикагелях лихросфер Si 100 и гиперсил достигается одинаковое
разделение, хотя удельные поверхности их различны. Более высокая
плотность заполнения гиперсилом компенсирует его меньшую удельную
поверхность. Наиболее быстрое разделение при удовлетворительном
разрешении достигается на силикагеле с наименьшей удельной поверхностью
(лихросфе-
Хроматографическая колонка 37
ре Si 500). Поскольку свойства разных силикагелей различаются (см. табл.
2.3), сравнение удерживающей способности можно проводить только при
условии стандартизации коэффициентов емкости при различных величинах
удельной поверхности (vsp), плотности упаковки (р) и объемной доли
элюента (ет) в колонке [31]:
/С* = А(ег/и.Рр) (7)
Если химические свойства поверхности силикагелей идентичны, то
"константы адсорбции" (К*) должны быть одинаковы. В свою очередь если К*
различаются, то химические свойства поверхности и особенно pH также
различаются (см. рис. 2.4, разд. 2.2.2).
2.2.3.2. Влияние элюента. Элюотропные ряды. Выбор элюента, как
правило, в более значительной степени влияет на разделение, чем выбор
неподвижной фазы. Существует правило: чем прочнее элюент адсорбируется на
неподвижной фазе, тем больше его элюирующая способность. Молекулы элюента
и растворенных в нем соединений конкурируют за адсорбционные центры на
поверхности силикагеля [33]. Вследствие большого избытка элюента
конкуренция происходит всегда, и поэтому элюирование полярных соединений
можно проводить даже относительно слабополярными элюентами. В
классической
адсорбционной хроматографии органические растворители
классифицируют по их элюирующей способности ео и располагают в так
называемые элюотропные ряды [33]. Большинство органических растворителей,
входящих в эти ряды, неприемлемы для ВЭЖХ, в которой используются
фотометрические детекторы. н-Алканы по элюирующей способности практически
не отличаются от изоалканов, однако более предпочтительны в качестве
элюентов, поскольку имеют меньшую вязкость. Дихлор-метан и в меньшей
степени хлороформ используют как компоненты полярных элюентов. Элюирующую
способность увеличивают путем добавления спиртов, эфиров и
ацетонитрила.
Поскольку эти растворители значительно отличаются по элюирующей
способности от алканов и дихлорметана, добавление даже небольших их
количеств сильно меняет общую элюирующую способность. Изменение состава
элюента даже в пределах одного процента может критическим образом
изменить его
элюирующую способность. Приготавливать смеси таких элюентов строго
воспроизводимого состава очень сложно, кроме того, их состав может
изменяться при хранении (испарение одного из компонентов), поэтому
адсорбционная хроматография имеет репутацию метода с плохой
воспроизводимостью.
Смеси растворителей, обладающие одинаковой элюирующей способностью,
можно приготовить или путем смешения больших
38 Глава 2
н-Пентан C3H7CI CH2CI2 CiHjCN CHjOH
|-'-I-1-1-|-1-И--I-1-h-1-1-1-H
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7
............. Пентан-
изопропилхлорид
№ 50 100
. i . j_!__,-iii. ...i пентан-
дихлорметан .
1 5 10 50 100
98
i-1-!-i-i не смешивается U Пентан-
ацетонигрил
0,5 1 7 3 100
68
i_________________________--.- ' ¦ не смешивается ii Пентан- метанол
0,5 1 2 3 100
,i,i | ..I диотрмвтан-
ацетонитрил
2 5 10 50 100
Ю 30
Дихлорметан - метанол
0,5 2
5 20 50 100
5 70
-|-------------------------
------i ¦ ; 1 1 J Ацетонитрил-метанол
1 ю га 50 ю о
Рис. 2.6. Элюирующая способность смесей растворителей.
количеств растворителей с близкой элюирующей способностью, или путем
добавления очень небольшого количества растворителя с высокой элюирующей
способностью к основному неполярному компоненту элюента. На рис. 2.6
приведена схема, позволяющая сравнивать элюирующую способность смесей
растворителей. Например, элюирующая способность смеси пентана и
дихлорметана (1 : 1) соответствует таковой для 1%-ного раствора
ацетонитрила в пентане или примерно 0,3%-ного раствора метанола в
