Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Хеншен А. -> "Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии" -> 13

Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.

Хеншен А. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии — М.: Мир, 1988. — 688 c.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка): visokoeffektivnayajidkostnayahromatograf1988.djvu
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 296 >> Следующая

при использовании неполярных элюентов незначительное изменение pH
поверхности оказывает сильное влияние на удерживание веществ и
эффективность колонки (на рис. 2.4 это показано на примере разделения
ароматических аминов при элюировании дихлорметаном). Это явление может
помочь открыть новые подходы к оптимизации процесса разделения соединений
с основными или кислотными свойствами как при помощи адсорбционной
хроматографии
-1489
34 Глава 2
Гиперсил, pH 9,0 'i
1 А

8
Рис. 2.4. Разделение ароматических аминов на "основном" и "нейтральном"
силикагеле при элюировании неполярным элю-ентом [30].
Элюент: дихлорметан;
проба: 1 -бензол, 2 - о-нитроанилин, 3 -N.N-дн-метиланилин, 4 - N-ме-
тилаиилин, 5 - л-нитро-анилин, 6 - л-нитроаии-лин, 7 - анилин.
[31], так и при разделении на химически привитых фазах [17, 32].
Силикагели или привитые фазы на основе силикагелей стабильны в водных
растворах в интервале pH 2-8 [28, 29]. При других значениях pH силикагель
растворяется или привитые группы гидролизуются. При комнатной температуре
и элюировании водными элюентами с нейтральным значением pH в условиях
длительной эксплуатации отмечают изменение коэффициента емкости,
обусловленное, по-видимому, гидролизом. Растворимость силикагеля в воде
незначительна и при комнатной температуре составляет 10-2 мг/мл [28]. Это
позволяет насыщать колонки элюентом до ввода проб. При проведении
биохимических анализов обычно рекомендуется устанавливать перед
аналитической колонкой предколонку с целью удаления из пробы полимерных
нерастворимых или коллоидных частиц. Предколонка защищает аналитическую
колонку и увеличивает время жизни последней.
Диаметр пор стандартного силикагеля можно увеличить при помощи
гидротермальной обработки [28, 29]. Таким методом обрабатывают готовые
силикагели, например предназначенные
Хроматографическая колонка 35
для разделения полимеров методом адсорбционной или эксклю-зионной
хроматографии. Свойства одного из таких силикагелей (лихросфера Si 500)
приведены в табл. 2.3, а возможности применения в качестве неподвижной
фазы подробно обсуждены в разд. 2.2.8. Необходимо отметить, что
высокотемпературная обработка силикагеля в присутствии воды или спиртов,
например высушивание увлажненного водой силикагеля при повышенной
температуре, может приводить к изменению его пористой структуры и, как
правило, уменьшает его удельную поверхность [29].
На химическую природу поверхности силикагеля оказывают влияние
поверхностные силанольные ( = Si-ОН) и силоксано-вые ( = Si-О-Si=s)
группы. Первые в основном ответственны за сорбционные процессы или
реакции с силанами. Экспериментально и теоретически установлено, что
поверхностная концентрация силанольных групп составляет 7-8 мкмоль/м2
[28]. Поэтому можно предположить, что среднее расстояние между
силанольными группами равно 0,4-0,5 нм. Высушивание силикагеля при
температурах ниже 150°С приводит к удалению только физически
адсорбированной воды, а при температурах выше 200 °С удаляется вода,
химически включенная в структуру силикагеля. Это сопровождается
уменьшением поверхностной концентрации силанольных групп и служит
причиной изменения хроматографических свойств силикагелей.
2.2.3. Разделение на силикагеле
В адсорбционной хроматографии силикагель используют в качестве полярной
неподвижной фазы в сочетании с неполярными УФ-прозрачными элюентами,
например алифатическими углеводородами или дихлорметаном, в которые
добавляют спирты, диоксан или тетрагидрофуран. Соединения, не поддающиеся
разделению в таких системах, следует разделять при помощи обращенно-
фазовой хроматографии, когда неподвижная фаза неполярна, а подвижная -
сильнополярна (например, водные растворы ацетонитрила или метанола).
Поскольку классическая адсорбционная хроматография применяется в биохимии
очень мало, данный метод будет рассмотрен лишь кратко. Как и в любой
другой хроматографической системе, в этом случае трудно выявить влияние
отдельных характеристик процесса на разделение. Поэтому
хроматографическую среду, взаимодействие растворенных соединений,
растворителя и неподвижной фазы приходится учитывать в совокупности, Тем
не менее, чтобы упростить описание системы разделения, каждый из
параметров, например неподвижная фаза, полярность растворителя и
структура растворенного соединения, и его влияние на разделение будут
рассмотрены лтдельно.
3*
36 Глава 2
2.2.З.1. Влияние свойств силикагеля. Как отмечалось выше, за
удерживание веществ на колонке ответственны главным образом поверхностные
силанольные группы, и поскольку они обладают кислотными свойствами,
соединения основного характера удерживаются прочнее, чем кислотные или
нейтральные. Удерживание усиливается с увеличением поверхности сорбента,
приходящейся на единицу объема колонки. На рис. 2.5 показано разделение
Предыдущая << 1 .. 7 8 9 10 11 12 < 13 > 14 15 16 17 18 19 .. 296 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed