Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
l.ys-Asp-Giu-Gly-Pro-TyrLys-Met-GIu-His-Phe-Arg-Trp-Giy-Ser-Pro-Pro-
Lys-Asp-OH
Оптимальная подвижная фаза для разделения и обнаружения по
флуоресценции - смесь буферный раствор (pH 7,0)/ацетонитрил в соотношении
80 : 17,5 для окситоцина и 80: 15 для орнипрессина и лизин-вазопрессина.
Одновременное обнаружение окситоцина по поглощению в УФ-области и по
флуоресценции (рис. 5.25) ясно показывает преимущество метода
послеколоночной модификации [2].
5.3.3. Аденогипофизарные гормоны
В передней доле гипофиза вырабатывается целый ряд гормонов, различающихся
по структуре и молекулярной массе, в том числе тиротропин (ТСГ),
адренокортикотропин (АКТГ), мела-потропин (МСГ), лютеинизирующий гормон
(ЛГ, гормон стимулирующий интерстициальные клетки),
фолликулостимулирующий гормон (ФСГ), пролактин (лютеотропин, ЛТГ), гормон
роста (ГР, соматотропин) и липотропин(ы) (ЛПГ). Структуры некоторых
аденогипофизарных гормонов приведены в табл. 5.15.
5.3.3.1. Кортикотропин и меланотропин. В последние годы опубликовано
много работ, в том числе и теоретических, посвященных разделению
кортикотропинов [8, 14, 15, 43, 56, 61, 70- 72, 80, 88-90] и
меланотропинов [6, 14, 15, 43, 56, 61, 66, 71, 72, 91, 92] методом ВЭЖХ.
Подробные условия разделения адено-кортикотропных гормонов и
меланоцитстимулирующих гормонов, включая их производные и фрагменты,
приведены в табл. 5.16 и 5.17.
При разделении слабых органических кислот и оснований с использованием
смесей вода/метанол (ацетонитрил) методом
Таблица 5.16. Условия разделения методом ВЭЖХ кортикотропных гормонов и
их производных (структуры см. в табл. 5.15)
Неподвижная фаза
Элюент Колонка, Обнаружение (нм) k
мм
Лите-
ратура
Нуклеосил 5 С18 (5 мкм)
ц-Бондапак Сш (10 мкм)
Партисил-ODS (10 мкм)
Гиперсил-ODS (5 мкм)
ц-Бондапак Cie (10 мкм)
Нуклеосил 5 Cig
(5 мкм)
АКТГ человеческий
0,005 М тартратный буфер (pH 3,0)+0,005 М 1-бутаисульфонат натрия+0,05 М
сульфат натрия/50% ацетонитрила+50% 0,005 М тарт-ратного буфера (pH
3,0)+0,01 М 1-бутансуль-фонат натрия+0,1 М сульфат натрия (2:3) (1
мл/мин)
А: 0,08%-ная трифторуксуспая кислота, Б: аце-тонитрил/0,08%-ная
трифторуксусная кислота (49:51), градиент от 3,5 до 49% ацетонитрила за
20 мин (1 мл/мин)
А: 1%-ная трифторуксусная кислота, Б: мета-иол/вода/трифторуксусная
кислота (80:19:1), линейный градиент от А до Б (0,7 мл/мнн)
0,1 М фосфатный буфер (pH 2,1)/ацетоннтрил, градиент с тремя линейными
участками (1 мл/мин) до 60% ацетоннтрила Ацетонитрил/0,02 М фосфатный
буфер (pH 2,1), градиент с тремя линейными участками от 0 до 60% (1
мл/мин) ацетонитрила за 50 мин А: 0,08-ная трифторуксусная кислота Б:
ацетонитрил/0,08%-ная трифторуксусная кислота (7:3), градиент от 30 до
50% Б (30 мии) (l мл/мин)
АКТГ (свиной)
0,005 М тартратный буфер (pH 3,0)+0,005 М 1-бутаисульфонат натрия+0,05 М
сульфат натрия/50% ацетонитрила+50% 0,005 М тарт-ратного буфера (pH
3,0)+0,01 М 1-бутан-
4X200 УФ (220)
3,9 <300
4X250
5X100
5X100
3,9X300
УФ (206)
УФ (280)
УФ (225)
флуоресценция
(275/370)
УФ (225),
флуоресценция
(275/370)
УФ (206)
4X200 УФ (220)
20,4 мин
(время элюирования)
30,5 мин (время удерж.)
70
61
88
14
61
70
Гиперсил-ODS
(5 мкм)
ц-Бондапак Cis
(10 мкм)
сульфонат натрия+0,1 М сульфат натрия (2:3) (1 мл/мин)
Ацетонитрил/0,02 М фосфатный буфер (pH 2,1), градиент с тремя линейными
участками (1 мл/мин) от 0 до 60% ацетонитрила за 50 мин
А: 0,2 М фосфатный буфер (pH 2,1), Б: ацетонитрил, линейный градиент от А
до Б (2% ацетонитрила/мин)
А: 0,2 М фосфатный буфер (pH 2,1), Б: тетра-гндрофуран, линейный градиент
от А до Б, (2% тетрагидрофурана/мии)
А: 0,2 М фосфатный буфер (pH 2,1), Б: диок-сан, линейный градиент от А до
Б (2% ди-оксана/мнн)
А: 0,2 М фосфатный буфер (pH 2,1), Б: метанол, линейный градиент от А до
Б (2% ме-танола/мии)
Ацетонитрил/0,1 М фосфатный буфер (pH 2,3), градиент с тремя линейными
участками (1 мл/мин}, начиная с 0% ацетонитрила Ацетонитрил/0,1 М
