Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гуляев Г.В. -> "Генетика " -> 72

Генетика - Гуляев Г.В.

Гуляев Г.В. Генетика — М.: Колос, 1984. — 351 c.
Скачать (прямая ссылка): genetika1984.pdf
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 162 >> Следующая

Однако с его помощью получить молекулы аланиновой т-РНК не удалось. Оказалось, что транспортные РНК синтезируются на гене не в том виде, как они потом существуют в клетках, а в форме более длинной цепочки. Химический синтез гена технически очень труден и требует знания его нуклеотидной структуры. Возможности искусственного синтеза генов неизмеримо возросли в связи с открытием фермента обратной транскриптазы. При наличии матричной (информационной) РНК, соответствующей опре-
.а-а-а-а-а-а
А-А-А-А-А-А Т -т-т-т-т-т-он -затравка Мд2+ Л дАТФ, ЗГТФ, Ь дитф, д ТТФ, Г 37° 120мин J 4 -A -A i -А 'А ----:----
f-T-T-T-T-f.............
*
Т-Т-Т-Т-Т- г-
И ~ РНК глобина
Обратная
транекриптаза.
И-РНК глобина синтезированная ' ДНК-копия
Обработка щелочью С бабадная ДНК-
500 нуклеотидоб - копия
Рис. 65. Схема получения ДНК глобина кролика.
деленному гену, стало возможным ферментативным путем воспроизвести его. Этот процесс основан на транскрибировании гена с молекулы его «-РНК. С помощью фермента ревертазы получают /с-ДНК (ферментативно синтезированная копия РНК), комплементарную ж-РНК (матричная РНК), которая содержит в себе структурную информацию данного гена. Из полученного набора молекул извлекают /с-ДНК полной длины и используют ее как матрицу для синтеза второй нити ДНК. Принципиально теперь открыт путь к синтезу любых из существующих генов, независимо от их сложности, предопределяющих своей структурой качество синтезируемых белков и совершенно новых генов из нуклеотидов' ДНК.
В 1972 г. в ряде стран были начаты опыты по ферментативному синтезу гена, контролирующего образование глобина —¦ белка, входящего в состав гемоглобина крови. В качестве матрицы использовали проверенную на биологическую активность информационную РНК глобина из клеток человека, кролика и мыши. На этой м-РНК, как на матрице, с помощью обратной транскриптазы строились соответствующие гены. Размер молекул полученной синтетической ДНК близко соответствовал м-РНК, служившей матрицей, и ожидаемой величине гена глобина. В качестве «затравки» использовали дезокситимидиловую кислоту (рис. 65).
Для доказательства идентичности синтезированных генов естественным их проверяют на биологическую активность. Недавно ученые Массачусетского технологического института (США) синтезировали искусственный ген простейшей бактерии. Пересаженный в живую бактерию, он функционировал как естественный.
Работы по ферментативному синтезу генов в настоящее время широко развернулись в лабораториях многих стран мира.
ГИБРИДИЗАЦИЯ СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК
В 1960 г. французский биолог Ж- Барский с сотрудниками, выращивая вне организма в культуре ткани клетки двух линий мышей, обнаружил в небольшом количестве третий тип клеток. Эти клетки оказались гибридными и могли размножаться in vitro. По морфологическим и биологическим признакам гибридные клетки были промежуточными между исходными родительскими клетками. Однако спонтанное слияние клеток в культуре ткани происходит очень редко, поэтому использование таких гибридных клеток для проведения биохимических и генетических экспериментов затруднено.
Было известно, что клетки, зараженные каким-нибудь вирусом, могут сливаться со здоровыми клетками и образовывать гигантские многоядерные клетки. Эти наблюдения использовали И. Ока-да в Японии и Г. Харрис в Англии для разработки техники гибридизации соматических клеток. Они употребляли для гибридизации вирус Сендай, обладающий способностью сливать клетки между собой. В результате обработки этого вируса ультрафиолетовыми лучами или алкилирующим мутагеном удается повредить его РНК и оставить неповрежденной белковую оболочку. Такой инактивированный вирус утрачивает свои инфекционные свойства, но сохраняет способность сливать соматические клетки. С помощью инактивированного вируса Сендай удалось повысить выход гибридных клеток в несколько тысяч раз. При внесении инактивированного вируса Сендай в смешанную культуру двух типов клеток в некотором количестве образуются многоядерные гибридные клетки—• гетерокарионы, содержащие в общей цитоплазме ядра обеих родительских клеток. Большинство многоядерных гетерокарионов быстро погибает, но те из них, которые содержат по одному ядру обеих исходных клеток, часто выживают и размножаются делением. После митоза и деления цитоплазмы из двуядерного гетеро-кариона образуются две одноядерные клетки (синкарионы), т. е. настоящие гибридные соматические клетки (рис. 66). Каждая из них содержит один набор хромосом линии А и один набор линии Б.
Используя вирус Сендай, удалось осуществить слияние клеток абсолютно разных видов организмов и тканей. В качестве родительских брали самые разные клетки животных, человека и бактерий. При слиянии клеток разных видов животных были получены межвидовые гибриды клеток мыши и человека (рис. 67), крысы и человека, человека и китайского хомячка, человека и курицы, человека и москита, крысы и мыши, мула и мыши и др. Оказалось возможным также гибридизировать клетки разных тканей, например лимфоцита и фибропласта, или нормальные клетки с опухолевыми. Такие межвидовые гибридные клетки оказываются жизнеспособными и часто размножаются в течение длительного времени.
Предыдущая << 1 .. 66 67 68 69 70 71 < 72 > 73 74 75 76 77 78 .. 162 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed