Болезни рыб и основы рыбоводства - Грищенко Л.И.
ISBN 5-10-003419-Х
Скачать (прямая ссылка):
163
11. Основные свойства бактерий сем. Vlbrionaceae
Бактерии Подвижность Окси-даза Среда Хью-Лейфсона Среды Гисса
О Ф ман-
HHT мальтоза лактоза сахароза глюкоза сероводород Aeromonas hydrophila V. hydrophila + + + + кг кг — KT кг + А. hydrophila, v. anaerogenes + + + + к к - к к + V. salmonicida — + + КГ кг — — кг — Pseudomonas fluorescens + + + — — — — к к ± Ps. cyprinisepticum + + + — — - — — - ± Ps. putida + + — — к к к± к + Ps. capsulata + + — - — - — - ± Vibrio anguillarum + + + + к к — + к — Обозначения: O — окисление; Ф — ферментация; (+) — положительная реакция, наличие признака; (—) — отрицательная реакция, отсутствие признака; ± — сомнительный результат; к — образование кислоты; кг — образование кис
ческих исследований засевают на первичные однослойные или перевиваемые клеточные культуры, полученные из органов и тканей рыб. В нашей стране выращивают в основном две клеточные линии: EPC5 полученную из эпителия оспенных разростов карпа, и FHM, полученную из кожно-мышечной ткани рыбы пимефала. Посевы бактерий и вирусов инкубируют в термостате при температуре 24—26 °С.
Для ускоренной дифференциации псевдомонад и аэромонад от сходных с ними родов бактерий определяют оксидазную активность культур и способность их расщеплять глюкозу на среде Хью-Л ейфсона (тест окисления — ферментации).
Одновременно или после окончания посевов готовят мазки крови и отпечатки из некротических участков, язв, паренхиматозных органов, трассудата или экссудата. Их окрашивают по Романовскому—Гимза или по Граму общепринятыми способами.
МИКОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
При подозрении на грибковые заболевания рыб проводят микологические, а при бранхиомикозе и глубоких микозах — гистологические исследования.
При большинстве микозов рыб (бранхиомикоз, сапролегниоз и др.) достаточно надежным методом диагностики является микроскопическое исследование патологического материала. Исследуют нативные препараты из пораженных органов с добавлением нескольких капель 50%-ного водного раствора глицерина, 0,9%-ного раствора хлорида натрия или водопроводной воды.
При исследовании на бранхиомикоз микроскопируют некроти-зированные участки или подвергнутые гнилостному разложению жабры больных рыб. Соскобы с жабр помещают на предметное стекло, добавляют несколько капель воды или других растворов, раздавливают покровным стеклом и просматривают при малом и среднем увеличении. В поле зрения микроскопа хорошо видны гифы гриба со спорами. В гистологических срезах они располагаются в просвете сосудов и респираторных складках, окрашиваются гематоксилин-эозином в темно-лиловый цвет.
Для обнаружения сапролегниевых грибов исследуют под микроскопом соскобы с кожи, жабр, носовых ямок, а также икру. При этом хорошо видны гифы гриба, заканчивающиеся зооспоран-гиями.
При глубоких микозах (ихтиофонозе, экзофиаламикозе, мико-тическом грануломатозе) исследуют микроскопически нативные раздавленные препараты из пораженных органов (печени, почек, селезенки и др.).
Чистые культуры грибов выделяют на обычных грибных средах—агаре Сабуро, Чапека, МПА. Для выделения возбудителя бранхиомикоза посевы делают из жабр, подвергшихся гнилостному разложению. Возбудителей ихтиофоноза и других глубоких ми
165
козов культивируют на МПА с добавлением 1 % сыворотки крупного рогатого скота, а также на глюкозо-дрожжевом агаре.
Сапролегниевые грибы хорошо растут на стерилизованных кипячением семенах конопли и льна, помещенных в агаровые пластины (1,5%-ный агар на воде), которые раскладывают в чашках Петри. Грибок растет при комнатной температуре в виде ватообразных колоний. Его также культивируют на МПА, агаре Чапека и Сабуро, для чего вырезают из них небольшие блоки, засевают культурой и раскладывают в чашки Петри.
ПОСТАНОВКА БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ
В ряде случае для установления окончательного диагноза на инфекционную болезнь, а также при решении вопроса о снятии карантина или карантинных ограничений с хозяйства ставят биологические пробы. При постановке их с целью определения патогеннос-ти возбудителей используют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей больных или подозреваемых в заражении рыб.
Биопробы ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей. Наблюдения ведут ежедневно, учитывают число погибших рыб, клинические признаки болезни и характер патологоанатоми-ческих изменений. Продолжительность опытов устанавливают с учетом инкубационного периода и длительности течения заболевания в естественных условиях. В опыты отбирают восприимчивых к данному заболеванию рыб из благополучного хозяйства. В каждой серии для заражения и контроля берут по 10 рыб.
При вирусных болезнях в качестве инфекционного материала берут свежеприготовленную вируссодержащую суспензию культуры клеток или безбактериальные фильтраты суспензий органов больных рыб. Количество вируссодержащего материала и способ заражения подбирают индивидуально для каждого заболевания. Материал вводят внутрибрюшинно, контактным методом, орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей вирус. Параллельно ставят контрольные опыты.
