Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 95

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 139 >> Следующая

Препарирование биологических объектов для РЭМ
251
жек в течение этого процесса. Так, обычно удобно выбирать и очищать
образцы ткани во второй половине первого дня; фиксировать в альдегиде в
течение ночи, промывать и производить последующую фиксацию в осмии,
обезвоживать и монтировать образец на объектодержателе на второй день;
наносить покрытия на образец в первую очередь на третий день и проводить
остаток этого дня за исследованием образца в микроскопе. Последней
стадией обезвоживания, если не собираются исследовать разрезанный или
разломанный материал, является процедура сушки в критической точке.
11.3.7.1. Сушка в критической точке
Специалисты в области растровой электронной микроскопии вновь открыли для
себя метод сушки -в критической точке, который был впервые разработан
тридцать лет назад для изучения бактериальных жгутиковых [370]. Основная
идея метода состоит в том, что двухфазные состояния (пар и жидкость)
большинства летучих жидкостей исчезают при некоторой температуре и
давлении - в так называемой критической точке. В критической точке две
фазы находятся в равновесии, фазовая граница исчезает и, следовательно,
отсутствует поверхностное натяжение. Уже было много написано о теории и
практике сушки в критической точке, и подробности методики можно найти в
работах [371, 372].
Практические аспекты метода включают перенесение тканей из обезвоживающих
жидкостей (метанол, этанол, ацетон) через промежуточные жидкости
(амилацетат, фреон-TF) в переходную жидкость (жидкая двуокись углерода
С02 или фреон-13) в приборе для сушки в критической точке или контейнере.
В идеальном случае было бы желательным высушивать в критической точке
воды, но критическая температура воды (648 К) столь велика, что пришлось
бы совершенно загубить образец.
.Мы уже обсуждали значение обезвоживающих жидкостей. Переходные жидкости
являются химическими препаратами, в которых происходит сушка в
критической точке. Критическая температура С02 составляет 304 К,
критическое давление равно 7,39 МПа, а для фреона-13
(монохлортрифторметана) - 311 К и 3,87 МПа соответственно. Промежуточные
жидкости используются, если обезвоживающие жидкости не смешиваются с
переходной жидкостью. Такая проблема не возникает при использовании
этанола или ацетона и жидкой углекислоты С02, но необходимо вводить
промежуточную жидкость между этанолом - ацетоном и фтористым углеродом -
фреоном-13.
Амилацетат может использоваться в качестве промежуточной жидкости между
этанолом - ацетоном и С02, так как он
252
Глава 11
несколько менее летуч и уменьшает вероятность того, что образец будет
высушен при переносе образца в аппарат для сушки в критической точке.
Другим преимуществом амилацетата является отчетливый (но токсичный)
запах, и отсутствие его в атмосфере переходных жидкостей является точным
индикатором того, что перенос успешно осуществлен. В работе [373]
показана важность полного удаления промежуточной жидкости перед
выполнением сушки.
Хотя процедура сушки в критической точке приблизительно одинакова для
всех видов оборудования, в действительности существуют важные отличия
между различными имеющимися камерами сушки в критической точке, и важно
выполнять работу в соответствии с рекомендациями конкретного
изготовителя. До тех пор пока оператор помнит, что процесс происходит
внутри камеры, в которой достигаются высокие давления, и использует
технику с осторожностью, сушка в критической точке может выполняться
надежно и эффективно. Важно регулярно проверять клапаны, уплотнения и,
где это возможно, смотровые окна. Дальнейшие меры предосторожности по
технике безопасности описаны в статьях [372, 374]. В большинстве случаев
сушка в критической точке производится с использованием жидкого С02, та
как он дешевле и доступнее фреона-13. Углекислота С02 должна быть
безводной, не содержать частицы и для удобства должна поставляться в
цилиндре с сифоном. Если это важно, то цилиндр должен крепко закрываться
изнутри для удаления любых следов ржавчины, которая могла бы загрязнять
поверхность образца. Образец до конца обезвоживания следует помещать в
контейнере с предохранительной сеткой и с уплотнением.
В камере создается турбулентность жидкости, и, поскольку обычно
подвергается сушке сразу несколько различных образцов, эти контейнеры
предотвращают смешивание образцов. Единственное требование ко всем
контейнерам и подложкам состоит в том, чтобы они не препятствовали потоку
переходной жидкости и оставались погруженными внутрь обезвоживающей
жидкости до тех пор, пока камера заполнится под давлением. Как только
сушка в критической точке закончена, образцы должны быть немедленно
перенесены в эксикатор, где могут храниться до монтажа и нанесения
покрытия.
11.3.7.2. Лиофильная сушка
Лиофильная сушка является другим по отношению к сушке в критической точке
эффективным методом обезвоживания, хотя всегда имеется опасность
повреждения образца кристаллами льда. Замещение объекта проникающими
Предыдущая << 1 .. 89 90 91 92 93 94 < 95 > 96 97 98 99 100 101 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed