Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 90

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 84 85 86 87 88 89 < 90 > 91 92 93 94 95 96 .. 139 >> Следующая

поверхности толстых (0,1 мкм) залитых смолой срезов ткани, почки,
изготовленных с помощью стандартных методик, используемых в ПЭМ, в
результате чего были обнаружены суб-структурные детали субклеточных
органелл (рис. 11.7).
11.3.5.2. Получение изломов
Иногда лучше вскрывать внутренние детали объекта, используя метод
изломов. Твердые ткани могут разбиваться до фиксации. Используя лезвие
бритвы, легко получить чистые срезы поверхностей древесных образцов. В
работах [337, 338] рекомендуется древесину с низкой плотностью разрезать
в свежем виде либо после вымачивания в холодной воде, в то время как
более плотную древесину, прежде чем ее чисто разрезать, необходимо
размягчать в горячей воде. Остатки цитоплазмы могут быть удалены с
помощью 20%-ного раствора гипохлорита натрия, а после обезвоживания и
нанесения покрытия небольшие блоки древесины крепятся таким образом,
чтобы край между двумя подготовленными для исследований поверхностями был
бы направлен к коллектору, как показано на рис. 11.8. Несколько более
мягкие ткани могут быть разделены с помощью препаровальных игл до или
после фиксации, но более удовлетворительные изломы получаются из хрупкого
материала.
В работах :[339, 340] был предложен метод сухого излома, в котором
кусочек липкой ленты осторожно прижимается к обезвоженным и высушенным в
критической точке тканям. При удалении этого кусочка ленты происходят
отрыв некоторой части ткани и обнажение внутренней структуры.
Взаимодополняющие изломы могут быть получены при отрыве друг от друга
двух кусочков липкой ленты с небольшим кусочком ткани между ними; далее
для наблюдения они располагаются рядом на объектодержателе. Кусочки ткани
больших размеров могут быть разломаны в сухом виде либо путем разрезания
и разделения маленьким скальпелем, либо надрезом образца, оба края
которого удерживаются миниатюрным пинцетом, а затем разделяются. Примеры
препарирования таких объектов этим мето-
234
Глава И
Рис. 11.8. Поперечные и радиальные продольные поверхности древесины
Notojagus fusca |337|.
4
14
Рис. 11.9. Уплощенная эпителиоидальная клетка Хела, оголенная в сухом
виде методом липкой ленты и демонстрирующая нижнюю поверхность выращенных
краев (а), и оголенная методом липкой леиты поверхность клетки Хела, на
которой видны округлые органеллы (б) [340].
Препарирование биологических объектов для РЭМ
235
,* ¦'
* y-iAjSjjSp)j|gfr. ¦ДИ
ШШЯШ • v шшшш
¦R
(МШ
Ь мкн
¦ ш
шт
t г$? '? 'г~:\
шян
%
мжяу
5 мкм
у-"' ' ( *-" ^ >*л- '"'"•.....................................V*'/ с
Рис. 11.10. Растровая электронная микроскопия при низких температурах. а-
полученный при низкой температуре излом обработанных этанолом клеток
корня Lemna minor; б - нефиксированная поверхность излома клеток корня
Zea mais, полученная в гидратированном состоянии замораживанием; в--
полученный при низкой темпе* ратуре излом обработанных глицерином клеток
корня Lemna minor; г - полученный при низкой температуре нзлом залитых
смолой клеток корня Lemna minor.
дом показаны на рис. 11.9. Метод липкой ленты может быть одинаково хорошо
использован для одиночных клеток, закрепленных на стеклянной подложке с
помощью полилизина, выявляя органеллы и клеточную субструктуру.
Другой подход состоит в использовании метода излома в замороженном
состоянии, при котором, чтобы превратить жидкость в хрупкую твердую
массу, материал погружается в жидкий азот в нефиксированном,
фиксированном i[341], замещенном этанолом [342] или смолой-мономером
[343] состояниях. Этот ставший хрупким материал затем разламывается в
жидком азоте с использованием тупого скальпеля, а разломанные кусочки
вновь возвращаются в соответствующую позицию процесса под-
236
Глава 11
Рис. 11.11. Целый эритроцит цыпленка с выступающим разорванным ядром,
волокнами цитоплазмы (слева) и микротрубочками (справа). Маркер
соответствует 1 мкм [334].
готовки ткани, и препарирование доводится до конца. Результаты,
полученные при использовании данной методики, в качестве примеров
приведены на рис. 11.10. В недавно опубликованной работе [347] метод
излома в замороженном состоянии с большим успехом был использован для
изучения хроматина эритроцита цыпленка. Процедура заключается в быстром
замораживании пропитанных глицерином образцов, которые разламываются в
жидком азоте. После излома в замороженном состоянии клетки тканей
оттаивают в фиксаторе. Фиксация происходит очень быстро , поскольку
фиксатор быстро диффундирует в разломанные клетки, ив то же время имеется
достаточно времени для выхода растворяющих составляющих, позволяя за счет
этого глубоко "заглянуть" в клетку, как показано на рис. 11.11. Методы
изломов в замороженном состоянии имеют много преимуществ по сравнению с
изломом в сухом состоянии, не последним из которых является уменьшение
количества остатков на поверхности образца, которые могут не только
завуалировать поверхность, но и заряжаться под электронным пучком.
Предыдущая << 1 .. 84 85 86 87 88 89 < 90 > 91 92 93 94 95 96 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed