Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 86

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 139 >> Следующая

микроскопа. Частицы ткани размером до 1-2 мм3 могут быть извлечены
хирургическим путем из многоклеточных организмов; было бы желательно
получать более мелкие частицы растительного материала. Культура ткани,
одиночные клетки, микроорганизмы и органеллы изолированных клеток либо
могут быть собраны, переработаны в суспензии и помещены в капсулы из
агара до обработки, либо их можно осадить и прикрепить на подходящую
подложку, например стекло, свежий скол слюды или на диски из металла,
совместимого с тканью, с пластмассовым по-
Препарирование биологических объектов для РЭМ_______________223
Рис. 11.4. Моноциты человека на стекле. Маркер соответствует 10 мкм
крытием или без него. Другими словами, микроорганизмы можно изучать in
situ на поверхности ткани (естественно или искусственно вскрытой),
используя недавно описанную методику [323]. Прикрепленные образцы затем
могут быть подвергнуты препарированию. Стеклянные и слюдяные подложки
имеют дополнительное преимущество, так как сравнительные исследования,
как показано на рис. 11.4, могут быть выполнены с помощью светового
микроскбпа.
Для культуры тканей пластиковая посуда должна использоваться лишь в том
случае, если исследователь совершенно уверен, что она нерастворима в
органических растворителях, используемых для препарирования ткани. Этот
способ является наилучщим для обращения со многими культурами клеток
тканей млекопитающих, и такие клетки относительно просто прикреплять на
стеклянные покровные стекла, покрытые монослоем полилизина [324]. Метод
покрытия может быть использован и для других клеток, таких, как
микроорганизмы н однокле-
224
Глава И
Рис. 11.5. Культура клеток СНО-ткани на фильтре. Маркер соответст 10 мкм
[318].
Препарирование биологических объектов для РЭМ
225
точные морские водоросли, а также для частиц материи. Небольшие частицы
материи могут быть также собраны на покрытые пластиком микроскопические
сеточки, тонкие металлические^ сетки либо, как показано на рис. 11.5, на
один из имеющихся многочисленных коммерческих мембранных фильтров
(Millipore, Nuclepore, Flotronic и т. д.). Если должны использоваться
мембранные фильтры, то важно проверять их растворимость в различных
жидкостях, используемых для обработки, и понимать,'что мембрана, которая
представляется гладкой невооруженному глазу, при наблюдении в РЭМ часто
оказывается очень грубой и рифленой. Такие сильно нерегулярные
поверхности не пригодны для таких образцов, как клеточные органел-лы и
вирусы. В работах '[326, 327] опубликован полезный обзор по методам
препарирования, которые могут быть использованы для таких
микроорганизмов, как бактерии и грибы. В работах [262, 328] подробно
описываются способы, с помощью которых можно манипулировать с частицами,
собирать и монтировать их для исследования в РЭМ.
11.3.3. Очистка образца
Важно быть уверенным, что исследуемая поверхность является чистой и
свободной от внеклеточного материала. Некоторые внеклеточные материалы,
такие, как слизь, кровь или жидкости, выделяемые организмом, могут
загородить всю исследуемую поверхность; другие, такие, как пыль,
фрагменты клетки и ткани, могут загораживать части поверхности, и в
результате мы получим неполное изображение. Очистка вырезанных частей
ткани в пределах возможного должна быть выполнена как можно быстрее,
чтобы уменьшить вероятность посмертных и вызванных кислородным голоданием
(аноксией) изменений, которые, в частности, повреждают ткани
млекопитающих.
Загрязнения, вносимые водой, обычно связанные, как установлено, с
многоклеточной тканью животных, зачастую могут быть удалены путем
осторожного промывания или орошения образца буферным раствором такой же
концентрации и состава, как и клеточные жидкости, который поддерживается
при температуре, соответствующей естественному окружению образца.
Внутренние пространства могут быть дочиста промыты с помощью непрерывного
внутреннего промывания. Если осторожное промывание оказывается
недостаточным, тогда нужно использовать более бурное промывание с
применением или без небольшого количества поверхностно-активного
вещества. Если известен биохимический состав загрязняющего вещества, то
может быть применена энзимная обработка.
В основном использовались энзимы протеолитического, гли-
226 Глава 11
Рис. 11.6. Удаление загрязнений с поверхности [329].
а -часть изолированной проксимально!! трубки. Обработка почки одной НС1
позволяет проводить микродиссекцию отдельного нсфрона, В растровом
электронном микроскопе выявляется гладкая базальная поверхность этой
трубки, так как основание мембраны еще не повреждено; б - часть
изолированной проксимальной трубки, которая была обработана НС1 и
коллагеназоп. Коллагеназа селективно удаляет трубчатое основание
мембраны, выявляя складки или бороздки на трубке (указаны стрелками). Эти
складки соответствуют расположенным вблиз i основания зубчатым отросткам,
которые наблюдаются как в просвечивающем элек:ронном микроскопе, так н в
Предыдущая << 1 .. 80 81 82 83 84 85 < 86 > 87 88 89 90 91 92 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed