Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.
Скачать (прямая ссылка):
просвечивающего электронного микроскопа. Погрешность этого метода зависит
от того, насколько точно под прямым углом к металлическому слою можно
сделать срез смолы и фотографии среза. Простой метод точного определения
толщины пленки и размеров зерна был описан недавно в [307]. Было
установлено, что в линейных агрегатах латексных сфер материал покрытия
накапливается только на свободной поверхности сфер. Увеличение толщины
поперечного по отношению к линейному агрегату диаметра сферы будет равно
удвоенной толщине пленки, в то время как толщина диаметра, параллельного
агрегату, будет соответствовать толщине пленки. С помощью такого метода
были измерены толщины пленок, полученных при различных способах их
нанесения, с точностью ± 2 нм. Толщину пленки можно оценить по цветам
интерференции или в случае углерода по плотности осадка на белой
керамической плитке.
Методы нанесения покрытий
215
10.5.4. Удаление слоев нанесенных покрытий
Несмотря на трудности, возникающие при нанесении слоя покрытия на
образец, иногда необходимо удалить его. При соблюдении необходимой
осторожности твердые образцы можно восстановить до их исходного состояния
перед нанесением покрытия.
Если образец представляет собой полированный шлиф, покрытие можно легко
удалить, подвергая образец одной из окончательных операций полировки
(алмазным порошком размером ~6 мкм или порошком А1203 с размером зерна ~1
мкм). Если поверхность образца шероховатая или плоский образец нельзя
подвергнуть повторной полировке, для удаления покрытия следует применять
химические методы.
Если известно, что слой покрытия необходимо удалить с поверхности
шероховатого образца после исследования, то в качестве материала покрытия
предпочтительно использовать алюминий из-за легкости его удаления. В
[308] алюминий удалялся с поверхности геологических образцов погружением
их на несколько минут в свежеприготовленный раствор разбавленной щелочи.
Авторы [309] описали способ удаления золотых пленок с поверхности
минерализованных образцов погружением их в раствор цианида. Покрытие из
золота с палладием можно легко удалить за 1-8 ч с помощью раствора 10%-
ного FeCl в этаноле [310].
Слои углерода можно удалить, изменяя полярность в распылителе устройства
для нанесения покрытий, позволяя тем самым ионам аргона бомбить
поверхность образца. Следует соблюдать осторожность, чтобы только удалить
слон углерода и не нарушить находящийся под ним образец. Слои углерода на
неорганических образцах, таких, как горные породы, порошки и частицы,
можно эффективно удалять в радиочастотной обогащенной кислородом плазме.
Глава 11
ПРЕПАРИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ ДЛЯ РАСТРОВОЙ ЭЛЕКТРОННОЙ
МИКРОСКОПИИ
11.1. ВВЕДЕНИЕ
В этой и следующей главах мы рассмотрим практические аспекты
препарирования образцов как для растрового электронного микроскопа, так и
для рентгеновского микроанализатора, Хотя эти приборы очень сходны и во
многих случаях могут быть взаимозаменяемыми с точки зрения биолога,
полезно рассмотреть методики препарирования раздельно. Растровый
электронный микроскоп дает информацию о морфологии объекта, в то время
как рентгеновский микроанализатор дает аналитическую информацию об
образце. Для исследователя важно полностью осознать это различие, так как
оно существенно для выбора метода препарирования. Способы и методики,
которые приводятся в этих двух главах, обеспечат оптимальные условия
препарирования объекта для растровой электронной микроскопии или
рентгеновского микроанализа. Следует иметь в виду, что любые
неоптимальные условия подготовки объекта будут приводить к потере
передаваемой с образца информации. Далее также станет очевидным, что
зачастую будет необходимо прибегать к некоторому компромиссу между двумя
подходами, которые могут привести к потере информации с объекта.
Особое внимание будет уделено практическим, самостоятельным методам
препарирования, и, хотя показано, что понимание некоторых теоретических
аспектов может оказаться полезным, они будут сведены к минимуму, а
читателям будут указаны ключевые обзорные статьи по данной тематике. Мы
не стремимся снабжать биологов набором рецептов. Они уже описаны в
литературе, и лишь немногие из них могут привести к оптимальному
препарированию объекта, за исключением тех объектов, для которых они
разработаны. Обзор современных специальных методик препарирования для
широкого класса биологических объектов можно составить по серии
общеобразовательных статей в [сб. SEM/1980]. В главах будет сделана
попытка обоснования метода и практического выполнения препарирования
образца, но фактически выбор способа будет представлен экспериментатору.
Рекомендуется внимательно продумать, какую информацию можно получить с
объекта. Например, методики препарирования, призванные обеспечивать
защиту ма-
Препарирование биологических объектов для РЭМ
217
лого участка клеточной ультраструктуры для последующего исследования с
высоким разрешением, совершенно отличаются от методик, необходимых для
