Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 36

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 139 >> Следующая

значения С,.
7. Заменяем образец тонким эталоном и повторяем пп. 4-7 условия А или пп.
5-8 условия Б и пп. 1-5 и получаем значения C(i).
8. Рассчитываем абсолютную массовую долю данного элемента в образце:
С Л = (С;/С(,;|) Сд,
где С [А) - концентрация в мМ/кг сухого веса эталона в случае
дегидратированного материала или мМ/кг веса эталона во влажном состоянии
в том случае, когда образец и эталон во время анализа находятся в
полностью замороженном гидратированном состоянии.
9. Если эталон тщательно подобран, так что его органическая матрица
близка по составу к биологическому материалу, то неизвестную константу
пропорциональности G,-/G<,*> [см. уравнение (7.84)] можно исключить. Если
G//G(р не равно единице,
Количественный рентгеновский микроанализ
95-
то для получения точного значения абсолютная массовая доля Са должна
умножаться на G,/Gщ.
10. Концентрации (во влажном состоянии можно получить из измерений
обезвоженных срезов при условии, что толщина срезов остается постоянной,
что в процессе сушки образца не происходит усадки и что в процессе
обезвоживания происходит незначительное перераспределение элементов.
11. Или же, концентрации во влажном состоянии могут быть рассчитаны из
измерений обезвоженных срезов с использованием внутреннего эталона с
известной концентрацией воды. Образцы можно поместить в капсулу с
известной концентрацией, т. е. 25% полимерных криопротектантов, таких,
как гидр-оксиэтилкрахмал, растворенный в физиологически совместимых
растворах солей также с известными концентрациями. Замороженные в
гидратированном состоянии срезы делаются из образца плюс окружающий
криопротектант, и прежде чем образец начнет терять воду, быстро
выполняется несколько измерений интенсивности непрерывного излучения от
интересуемой области образца и окружающего криопротектанта с помощью
ранее описанных методов. Образец затем можно аккуратно высушить
лиофильной сушкой в колонне микроскопа, после чего можно произвести
элементный анализ ранее описанными методами. Так как интенсивность
непрерывного излучения пропорциональна суммарной массе анализируемого
объема, разница в интенсивности непрерывного излучения образца,
замороженного в полностью гидратированном состоянии и высушенного в
замороженном состоянии, обусловлена главным образом водой. Могут иметься
небольшие отклонения из-за различий в способности связывать воду
различными частями клеток матрицы и криопротектанта, но эти ошибки малы
по сравнению с большими ошибками, получаемыми при анализе образцов с
неопределенным содержанием воды.
Полимерный криоцротектант имеет дополнительное преимущество, которое
заключается в том, что он физиологически совместим с большинством тканей
и при использовании в концентрациях 20-25% будет стекловаться при быстром
замораживаний с минимальным разделением фаз растворенных электролитов.
Они представляют собой идеальный внутренний эталон для рентгеновского
микроанализа.
Расчет относительных весовых концентраций в сухом и влажном состояниях
производится по формуле
Q (сух)/[^й {ЩИВ 0^)1 = (вл)* (А.2)
где Ib(D) и Ib{W) -интенсивности непрерывного излучения от высушенного в
замороженном состоянии и замороженного в гидратированном состоянии
образцов соответственно.
96
Глава 7
Процентное содержание воды в образце определяется выражением
1вФ)
1-
/в(Ю
Х100% = % содержание воды. (А.З)
ПРИЛОЖЕНИЕ Б. РАБОЧИЕ ПРИМЕРЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО АНАЛИЗА БИОЛОГИЧЕСКИХ
МАТЕРИАЛОВ
Пример А. Расчет относительных массовых долей в образце.
Образец представляет собой высушенный замораживанием срез ткани корня
растения толщиной 0,5 мкм, укрепленный на нейлоновой пленке толщиной 70
нм, покрытой слоем алюминия толщиной 15 нм. Поддерживающая пленка
натягивается на бе-риллиевый держатель, и анализ выполняется в приборе с
пренебрежимо малым побочным фоном. Анализ на калий и хлор в клетках
верхушки корня производился с помощью детектора с дисперсией по энергии
(разрешение 150 эВ). Отношения пик/фон были измерены для хлора в
диапазоне 2,52-2,68 кэВ, а для калия в диапазоне 3,24-3,40 кэВ.
Непрерывное излучение измерялось в интервале 4,60-6,00 кэВ. Условия
измерения в приборе были следующими: ускоряющее напряжение 30 кВ, ток
пучка 1,0 мА, размер зонда на образце 2 мкм2, температура образца -100 К.
1) Среднее значение ?i = 0,293.
2) Среднее значение/в(Я) =79.
3) Рассчитываем IB(H)ki = IB(B) : 0,293x79 = 23.
4) Данные в табл. 7.14 получены из анализа клеток в области верхушки
корня.
5) Среднее значение интенсивности непрерывного излучения в пленке Ib(F)
=2145.
6) Для клетки 1 рассчитываем IB(S)-Ib(F) = 1в(Р) =4458- -2145=2313.
7) Для клетки 1 рассчитываем 1В(Р)-1в(В) =1в = 2313- -23 = 2290.
8) Для клетки 1 рассчитываем /а//в = 355/2290 = 0,155 = Cct.
9) Для клетки 1 рассчитываем /кДв = 2771/2290= 1,21 = Ск.
10) Повторяем пп. 6-9 для клеток 2-18 и получаем относительные массовые
доли С1 и К, как показано в табл. 7.15.
11) Относительные массовые доли для двух элементов в вакуолях клеток
Предыдущая << 1 .. 30 31 32 33 34 35 < 36 > 37 38 39 40 41 42 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed