Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гоулдстей Дж. -> "Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1" -> 119

Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 - Гоулдстей Дж.

Гоулдстей Дж., Ньюбери Д., Эчлин П., Джой Д., Фиори Ч., Лифшин Э. Растровая электронная микроскопия и рентгеновский микроанализ. Том 1 — М.: Мир, 1984. — 348 c.
Скачать (прямая ссылка): rastovayaelektronnayamicroskopiya1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 113 114 115 116 117 118 < 119 > 120 121 122 123 124 125 .. 139 >> Следующая

Межуточная клетка мМ/кг сух. веса мМ/кг влажн. веса г/Кг влажн. веса
59,9+6,5 2236+483 898+194 20,7+4,5 361 + 65 145+26 4,5+0,2
64+15 26+6 0,8+0,2 1805+348 725+140 25,1 +5,0 197+40 79+16
3,1+0,6
Межуточное пространство мМ/кг сух. веса мМ/кг влажн. веса г/кг влажи.
веса 77,4+2,3 2609+526 590+119 13,6+2,7 172+52 40+15 1,20+0,4
120+40 27+9 0,9+0,3 1966+508 445+115 15,8+4,1 186+35 42+8
1,6+0,3
') Процент воды выражался как среднее эначенне±среднеквадратичное
отклонение измерений, проделанных на пяти рацин элементов
(среднее±среднеквадратичное отклонение) основаны на фракциях сухого веса,
содержании воды и на ментах, базирующихся на анализе стандартных
растворов [468]. животных, Концеит-
калибровочных эле-
Препарирование биологических образцов для РМА________________3U
Рис. 12.14. Рентгеновские спектры, полученные во время микроанализа
определенных участков почечного клубочка крысы [468].
" - цитоплазма клетки выводящего протока; б - цитоплазма клетки
папиллярного эпителия; е - цитоплазма межуточной клетки; г - межуточное
пространство; д - полость выводящего канала; с-плазма в полости
капиллярного сосуда. Стрелка иа снимке д указывает потожсние пика железа.
Отсутствие пика в этом положении означает слабый или отсу: сгвх'ющин
гемолиз и свидетельствует о том, что произошло загрязнение.
Глава 12
при нарезке, в основном рассеивается в металлическом ноже и что при
изготовлении толстых срезов, замороженных в гидратированном состоянии,
маловероятно, что состояние таяния является проблемой.
В работе [200] в РЭМ исследовали замороженные в гидратированном состоянии
срезы, используя для получения изображения как просвечивающий режим, так
и режим вторичной электронной эмиссии. Нарезанные при температуре 193 К
срезы являются неровными, что отражает существование много-• кратных
изломов. Морфология искажается, и трудно распознать клеточные компоненты.
В нарезанных при температуре 223 К срезах были видны основные клеточные
фрагменты, в то время как срезы, нарезанные при температуре 243 К, были
гладкими и плоскими, а основные компоненты клетки легко распознавались
(рис. 12.12). Кроме того, в работах [200, 468] было достаточно
убедительно показано, что известные ионные градиенты, создаваемые внутри
систем in vitro, и концентрации электролита из систем in vivo сохраняются
в замороженных в гидратированном состоянии средах, нарезанных при
температурах от 233 до 244 К (рис. 12.13 и 12.14 и табл. 12.6).
Нужно идти на компромисс при выборе конечной температуры резки для
толстых срезов. При низких температурах невозможно различать
отличительные клеточные детали. Любые аналитические результаты, вероятно,
остаются под вопросом, поскольку процесс резки при низких температурах
приводит к образованию серии накладывающихся друг на друга пластинок
льда. Однако то, что может произойти какое-либо промежуточное таяние,
является маловероятным. При более высоких температурах срезы бывают
плоскими и характерные клеточные детали могут легко идентифицироваться,
и, хотя все еще остается риск промежуточного таяния, новые результаты
позволили бы предположить, что это не может представлять серьезную
проблему.
Проблема промежуточного таяния во время процесса изготовления тонких
срезов остается нерешенной. Она усложняется еще и тем, что стеклянные
ножи, используемые для нарезки тонких срезов, исключают потенциальный
отток тепла при всяком нагреве, создаваемом в процессе резки. В работе
[469] считается, что зона таяния ограничена слоем толщиной 60 нм, хотя
это оспаривается другими исследователями. Зона плавления таких размеров
не представляла бы серьезной проблемы для толстых срезов (толщиной 1-2
мкм), но, конечно, представляла бы важную проблему для тонких (толщиной
50-100 нм) срезов. В работе [464] считается, что эта проблема может быть
устранена путем резки при температуре ниже 173 К при использовании сухого
ножа и очень низких скоростей нарезки. Другая
Препарирование биологических образцов для РМА
313
потенциальная проблема, связанная с изготовлением срезов при низких
температурах, - это мигрирующая рекристаллизация льда, которая в свою
очередь могла бы привести к перераспределению электролитов. В работе
[470] было показано, что при 193 К рост кристалла льда не дает
существенного вклада в повреждение под действием ледяных кристаллитов в
замороженных тонких срезах. Данных о срезах, нарезанных при более высоких
температурах, не имеется.
Изготовление срезов при низких температурах является непростой
процедурой, будучи даже более сложной для растительного материала, и
рабочие параметры должны быть оптимизированы для каждого образца.
Контраст изображения нефиксированного материала является слабым, и часто
бывает трудно распознать знакомые клетки и ткани. Эти обескураживающие
замечания не должны, однако, удерживать людей от попыток использования
этого метода, потому что, несомненно, анализ срезов, и в частности
толстых, замороженных в гидратированном состоянии срезов, дает
Предыдущая << 1 .. 113 114 115 116 117 118 < 119 > 120 121 122 123 124 125 .. 139 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed