Клонирование ДНК. Методы - Гловер Д.
ISBN 5-03-001159-5
Скачать (прямая ссылка):
Музей бациллярных культур при Университете штата Огайо (The Bacillus Genetic Stock Centre, The Ohio State University) организует помощь и консультации по вопросам, связанным с поддержанием штаммов и плазмид, и, кроме того, выпускает весьма полезный каталог бациллярных штаммов, плазмид и фагов. Еще одним ценным источником информации может служить монография Гордона и соавт. [15], в которой большое число видов, отличных от В. subtilis, приводится с их регистрационными номерами по каталогу Американской коллекции ти* повых культур (American Type Culture Collection).
Методы клонирования в бациллах
233
2.2. Плазмиды
Наиболее распространенные плазмиды и векторы представлены в табл. 2—4. Многие векторы — это производные плазмид, изначально обнаруженных у Staphylococcus aureus, которые, как казалось, обладают способностью реплицироваться в клетках бацилл [12]. Некоторые из них родственны собственным плазмидам Bacillus [19]; так, pUBHO и рВС16 обнаруживают целый ряд областей взаимной гомологии [19]. Плазмида рВС16 — типичный представитель плазмид Bacillus', практически она идентична плазмиде рАВ124 [19]. Поскольку многие плазмиды грамположительных бактерий содержат протяженные участки гомологии, при конструировании векторов для клонирования следует следить за тем, чтобы гомологичные участки в них не повторялись. Надо сказать, что некоторые из плазмид, указанных в табл. 3, имеют две или более точек начала репликации, унаследованных от родительских форм. Это может служить причиной их относительной нестабильности. Полная нук-
Таблица 2. Плазмиды для клонирования в Bacillus
Плазмида Источник Мол. масса Маркеры1) Ссылка
(Х10-»)
рВС16 Bacillus cereus 3,0 Tc [34]
рАВ124 B. stearothermophilus 2,9 Tc [35]
pPLlO B. pumilus 4,4 Бактериоцин [36]
PPL7065 B. pumilus 4,6 Бактериоцин [37]
pIMI3 B. subtilis 1,5 Em [38]
PLS28 B. subtilis (natto) 4,1 --- [40]
pBSl B. subtilis 5,5 --- 134}
pFTB14 B. amyloliquefaciens 5,3 --- [40]
pUBHO Staphylococcus aureus 3,0 Km(Nm) [41]
pE194 S. aureus 2,4 Em [20, 41]
pC194 S. aureus 1,8 Cm [12, 21, 42}
pT127 S. aureus 2,9 Tc [12]
pC221 S. aureus 3,0 Cm [12]
PC223 S. aureus 3,0 Cm [12]
pUB112 S. aureus 3,0 Cm [12]
pSA501 S. aureus 2,8 Sm [41---431
(pS194)
pSA2100 S. aureus 4,7 Cm, Sm [41---43]
(pSC194)
') Маркеры устойчивости: Тс, к тетрациклину; Cm, к стрептомицину; Km, к канами-цину; Тр, к триметоприму; Ар, к ампициллину; Em, к эритромицину; Nm, к неомицину. Маркеры ауксотрофности: trp, биосинтез триптофана; leu, биосинтез лейцина; ilv, биосинтез изолейцнна — валина.
234
Глава 1
Таблица 3. Рекомбинантные плазмиды, используемые для клонирования
в Bacillus
Плазмида Мол. масса Родительские плазмиды Маркеры1) Ссылка
(ХЮ-6)
pBD6 5,8 pSA50I, pUBllO Sm, Km [2, 44J
pBD8 6,0 pSA2100, pUBllO Sm, Cm, Km 12, 44]
pBD9 5,4 pE194, pUBllO Em, Km [2, 44]
pBD64 3,2 pC194, pUBllO Cm, Km [44]
pHVll 3,3 pC194, pT127 Cm, Tc [3]
pHV41 4,5 pC194, pUBllO, pBR322 Cm, Km [45]
pLS103 5,0 pUBllO, ген trp B. pumilus Km, trp [1]
pLS105 5,4 pUBllO, ген trp B. lichenifor- Km, trp [46]
mis
pTLlO 9,4 pLS28, гены leu и Tp-r leu, Tp [47]
B. subtilis
pTL12 6,4 pLS28, гены leu и Tp-г leu, Tp [47]
В. subtilis
pTB90 4,4 pTB19 Km, Tc [48]
pPL608 3,5 pUBllO, ген cat-86 B. pumi Km, Cm [49]
lus, промотор фага SP02
pPL708 3,3 pPL608, полилинкер фага Km, Cm [50]
M13mp7
') См. примечания к табл. 2.
Таблица 4. Челночные векторы, реплицирующиеся в Е. coli и В. subtilis
