Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гааль Э. -> "Электрофорез в разделении биологических макромолекул" -> 76

Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.

Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул — М.: Мир, 1982. — 448 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforezvrazdeleniibiologicheskih1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 185 >> Следующая

Херрик и Лоренс [552] вымачивали гели 15 мин в водном растворе, содержавшем 0,02% неионного детергента (например» тритона Х-100 или твина 80) и 0,3% глицерина, затем ополаскивали их в воде и укладывали на полоски из плексигласа. Далее каждый гель вместе со своей подложкой вставляли в кусочек диализной трубки, которую обжимали вокруг геля таким образом, чтобы между ними не оставалось пузырьков воздуха. После этого полученный «сэндвич» сушили около 12 ч при 70°С, а затем помещали на плоскую поверхность гелем вниз. Диализную трубку разрезали с одной стороны и плексигласовую основу отделяли от геля. В результате одна сторона геля оставалась связанной с диализной мембраной, а другая была вполне доступна для проведения радиоавтографии. Прозрачные полоски высушенных гелей можно хранить в целлофановых конвертиках для марок.
Вудворт и Кларк i[ 1448] погружали гель в раствор, содержавший 90% (объем/объем) этанола и 5% (объем/объем) 1,2-пропандиола, а затем клали его между двумя листами смоченной в этом же растворе пленки из ацетата целлюлозы (трубки фирмы Visking), после чего помещали на ровный слой сухого силикагеля (50—100 меш).
Лим и др. [765] клали гель на влажную диализную мембрану и сверху накрывали дисками из пористого гидрофильного полиэтилена толщиной 8 мм. Затем весь этот «комплект» заворачивали в обертку фирмы Saran, скрепляли резиновыми стяжками, помещали под вакуумный колокол и сушили при пониженном давлении с небольшим притоком воздуха. Однако гели с очень высокой концентрацией акриламида или слишком толстые растрескивались в процессе сушки.
Еще один метод высушивания геля ![Ю69] состоит в следующем: пластину геля разрезают пополам и каждую часть помещают на достаточно большую стеклянную пластинку таким образом, чтобы со всех сторон геля оставались поля шириной 2 см. Поверх геля и на края пластинки ровным слоем толщиной 4 мм наливают расплавленный 2%-ный агар. После его застывания пластинку сушат под инфракрасной лампой до поч-
ти полного высыхания геля. Окончательное досушивание проводят при комнатной температуре.
Согласно другому методу [272], пластину геля погружают на несколько минут в 30%-ную (масса/объем) муравьиную кислоту, а затем наклеивают синтетическим клеем на гладкую поверхность доски из твердого дерева, где она и высыхает при комнатной температуре за 2—3 дня. Донгену и Пейлу [312] удалось высушить без усадки 5%-ный полиакриламидный гель на неокрашенной доске. Процесс длился около 36 ч. Боррис и Аронсон [152] предложили способ, предотвращающий прилипание геля к другим материалам. Они подвешивали гели на проволоках, воткнутых в их нижнюю часть за полосой маркерного красителя, и высушивали в вакуум-сушильном шкафу при пониженном давлении 300 мм Hg и 55 °С.
Полиакриламидные микрогели помещают в пробирку с 2 мл воды и дегидратируют методом лиофилизации. Кроме того, их можно погрузить в 0,5—1%-ную агарозу и высушить в токе воздуха или в термостате при 37 °С. После высушивания полиакриламидный гель легко отделяется от сухой агарозной пленки. Дегидратация происходит также при выдерживании гелей в вертикальном положении в течение нескольких минут в абсолютном спирте. Для этого используют мягкий пинцет, изготовленный из гибкой пружинной стали {915]. Для полной дегидратации требуется около 30 мин.
Высушенные гели снова набухают в воде или в 7%-ной уксусной кислоте за 3—4 ч при 70 °С. Однако они не впитывают такие жидкости, как диоксан, ацетон, толуол, метанол, гексан, эфир, хлористый метилен, этиленгликоль, простой монометило-вый эфир или диметилсульфоксид.
1.15.6. Разрезание полиакриламидных гелей
После электрофореза поддерживающую среду часто приходит-ся разделять на фрагменты для определения в них ферментативной или антигенной активности, либо радиоактивности. Полоски бумаги или ацетата целлюлозы и пленки высушенного агара можно легко разрезать ножницами или бритвой. Разрезание крахмального геля на продольные блоки относится к обычным процедурам, применяемым при электрофорезе в этом геле. Чтобы выделить разделенные компоненты из крахмального или агарового геля, его чаще всего разрезают бритвой в поперечном направлении. Описан способ фракционирования разбавленного) (0,05—0,1%) агарозного геля путем его расплавления при 80 °С; и последующего сбора капель с помощью коллектора фракций [546]. Что же касается полиакриламидного геля, обладающего
высокой разрешающей способностью, то для его разрезания требуются специальные устройства, позволяющие разделять гель на мелкие и равные фрагменты.
Способы разрезания должны удовлетворять следующим требованиям:
1. Необходимо, чтобы фрагменты разрезанного геля были одинаковых размеров.
2. Толщина этих фрагментов должна составлять от 0,1 до
2 мм.
3. Нельзя допускать деформации гелей.
4. Процедура разрезания должна быть быстрой.
5. Важно, чтобы приспособление для разрезания было простым.
Все типы приборов, созданных до настоящего времени, основаны на одном из перечисленных ниже принципов:
1. Разрезание геля с помощью набора фиксированных проволочек или бритв (аппараты типа яйцерезки).
Предыдущая << 1 .. 70 71 72 73 74 75 < 76 > 77 78 79 80 81 82 .. 185 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed