Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гааль Э. -> "Электрофорез в разделении биологических макромолекул" -> 64

Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.

Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул — М.: Мир, 1982. — 448 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforezvrazdeleniibiologicheskih1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 185 >> Следующая

Аналитический изотахофорез осуществляют в стеклянных или пластмассовых трубках с внутренним диаметром 0,4— 0,6 мм и длиной 50—100 см. Длина трубки определяется той парой ионов, которые труднее всего разделить, и зависит от величины пространства, занимаемого этой парой ионов, и отношения их подвижностей [351]. Иногда эта длина оказывается слишком большой, поэтому был предложен способ противотока [354], заключающийся в основном в создании тока ведущего электролита, направленного навстречу нормальной миграции ионов, благодаря чему эффективная длина трубки возрастает. Для регулирования температуры в трубке используют алюминиевый [349] или любой другой термостат. Если систему закрыть с одной стороны полупроницаемой мембраной, то зндо-смотический ток снизится до такой степени, что при разделении небольших ионов отпадает необходимость в применении полимера [349].
Описана конструкция аппарата для изотахофореза, представляющего собой единый термостатируемый блок, включающий отсеки для электродов, входное отверстие для пробы, неэластичные прямоугольные капилляры с поперечным сечением 0,2X1 мм и длиной 25 см и детекторную ячейку [138].
Прибор для аналитического изотахофореза под названием тахофор производится и продается фирмой LKB-Producter (Швеция).
Изотахофорез можно также проводить на полосках из ацетата целлюлозы [1349] и сочетать с «классическим» электрофорезом в опытах по двухмерному разделению [1188, 1351,
1352].
Детекторы. Поскольку во всех зонах создаются различные градиенты напряжения, в них выделяется и разное количество джоулева тепла. Этот факт удается использовать для выявления зон с помощью термометра. Применяют также детекторы проводимости и градиентов потенциала, позволяющие регист-
Рис. 65. Изотахофоре^рамма некоторых анионов [353]. 1— хлорид (ведущий электролит); 2— сульфат; 3— хлорат; 4 — хромат (УФ-поглощающий компонент); 5 — малонат; 6 — пиразол-3,5-дикарбоксилат (УФ-поглощающий компонент) ; 7 — адипат; 8 — ацетат; 9 — Р-хлорпропионат; 10 — фенилацетат (УФ-поглощающий компонент).
рировать как интегральные, так и дифференциальные кривые (рис. 65) [347, 350, 353, 520]. Для веществ, поглощающих в ультрафиолетовом свете, созданы высокочувствительные УФ-детекторы. В табл. 5 суммированы характеристики доступных в настоящее время детекторов.
Следует отметить, что минимальное количество изучаемого соединения, поддающееся выявлению, зависит от концентрации ведущего иона. Уменьшение этой концентрации, например, на порядок позволяет в такой же степени снизить наименьшее регистрируемое количество данного вещества, поскольку возможность его выявления в конечном счете определяется длиной соответствующей зоны. Однако слишком сильное снижение концентрации нецелесообразно, так как в этом случае зоны могут двигаться с разумной скоростью только при таком градиенте напряжения, который невозможно создать с помощью сущест-
Таблица 5
Детекторы, используемые при аналитическом изотахофорезе [353]
Тип Исполнение W>. О * 2) / з) Скан4) Общие
мм vmm * av » сведения
г-экв мин
Тепловой Термопара 15 мкм 5,0 5-10-10 30 Нет Качествен
(Си-константан) ный и ко
Термистор (микрова личествен
риант фирмы Phi- ный детек
lips) тор общего
типа
Кондукто- Индикаторные микро 0,05 5- Ю-12 10 То же^
метриче- электроды (1---
ский 4 кГц)
Основанный Индикаторные микро 0,05 5-10-12 10
на измере электроды в соче
нии гра тании с операцион
диента по ным усилителем ---
тенциала аналоговым устрой
ством (272 J)
Основанный Микрокювета для из 0,05 5-10-12 10 Да Количествен
на измере мерений при 205, ный специ
нии 256 и 280 нм фический
УФ-погло- детектора
щения
1) Минимальная определяемая длина зоны.
2) Минимальное определяемое количество одного ионного компонента.
*) Средняя продолжительности определения.
4) Возможность сканирования.
6) Покрытие на индикаторных электродах придает детектору специальные свойства. *) При использовании сильно поглощающего в УФ-свете буферного противоиона детектор лишается специфичности и переходит в разряд общих.
Предыдущая << 1 .. 58 59 60 61 62 63 < 64 > 65 66 67 68 69 70 .. 185 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed