Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.
Скачать (прямая ссылка):
Ньютон и др. [924] предложили следующий метод. После окончания электрофореза лист ацетата целлюлозы погружают в раствор, содержащий 0,2% алцианового синего, 0,05 М MgC[2 и 0,025 М ацетат натрия (pH 5,8) в смеси равных объемов этанола и воды, и оставляют на 30 мин при комнатной температуре. Затем лист промывают три раза в том же растворе, но без красителя. Из еще влажной пленки вырезают окрашенные в синий цвет зоны и перед каждой зоной вырезают соответствующие контрольные участки ацетата целлюлозы. Вырезанные участки растворяют в диметилсульфоксиде, содержащем 0,025 М MgCl2 и 0,025 М ацетат натрия (pH 5,8), встряхивая их в течение 30 мин при 37 СС. Оптическую плотность определяют при 678 нм. Чувствительность составляет 0,1—0,2 мкг.
Описан метод окрашивания полосок ацетата целлюлозы 0,1%-ным водным раствором толуидинового синего (pH доводят до 6—7 с помощью 2 М NH4OH) [587]. Полоски окрашивали в течение 10 мин и затем отмывали в 90%-ном этаноле до тех пор, пока фон не становился бледно-голубым. Окрашенные зоны вырезали, элюировали 1 мл 0,1 мл СаС12 и прогревали 5 мин при 70 °С. Затем добавляли 2 мл этанола и тщательно перемешивали раствор. После охлаждения раствора до комнатной температуры пленки удаляли и определяли оптическую плотность раствора при 635 нм. В случае минорных зон, содержащих менее 1 мкг гликозаминогликанов и потому окрашенных менее интенсивно, чувствительность метода можно повысить, если проводить элюцито смесью 0,3 мл 0,1 М СаС12 и 0,7 мл этанола. Минимальное определимое количество состав-
ляет около J мкг для гиалуроновой кислоты и 0,5 мкг для остальных полисахаридов. Максимальное определимое количество составляет 10 мкг для гепарина и 20 мкг для остальных гликозаминогликанов.
Дудман и Бишоп [321] окрашивали гликозаминогликаны проционовым голубым 3GS или проционовым красным 2 BS перед электрофорезом на полосках ацетата целлюлозы, что позволяло -в процессе электрофореза следить за миграцией окрашенных полисахаридов.
Литература
1. Abadi D. M. Clin. Chem., 15, 35 (1969).
2. Abe М., Kramer S. P., Seligman A. M. J. Histochem. Cytochem., 12, 364
(1964).
3. Abrams B. Clin. Sci., 40, 67 (1971).
4. Abrams B.t Freeman T. Clin. Sci., 37, 575 (1969).
5. Ackers G. K. Biochemistry, 3, 723 (1964).
6. Ackers G. K>, Steere R. L. Biochim, Biophys. Acta. (Amst.), 59, 137
(1962).
7. Afonso E. Clin. Chim. Acta, 10, 114 (1964).
8. Afonso E. Clin. Chim. Acta, 13, 107 (1966).
9. Ahlgren E., Eriksson K.-E., Vesterberg 0. Acta Chem. Scand., 21, 937
(1967).
10. Ahlroth A., Mutt V. Anal. Biochem., 37, 126 (1970).
11. Aitken D. М., Brown A. D. Biochem. J., 130, 645 (1972).
12. Akroyd P. Anal. Biochem., 19, 399 (1967).
13. Albanese A. A., Orto L>, Rossy J. Arch. Biochem. Biophys., 54, 304 (1955).
14. Allen /. М.. Beard М. E. Science, 149, 1507 (1965).
15. Allen J. М., Gockerman I. Ann. N. Y. Acad. Sci., 121, 616 (1969).
16. Allen J. М., Hyncik G. J. J. Histochem. Cytochem., 11, 169 (1963).
17. Allen R. A., Harley R. A.t Talamo R. C. Amer. J. Clin. Path., 62, 732
(1974).
18. Allen R. C. Ortec 4200 Electrophoresis System. Instr. Manual. (1969).
19. Allen R. C., Jamieson G. R. Anal. Biochem., 16, 450 (1966).
20. Allen R. C., Moore D. J. Anal. Biochem., 16, 457 (1966).
21. Allen R. С., Moore D. I., Dilworth R. H. J. Histochem. Cytochem., 17, 189 (1969).
22. Allen S. L Ann. N. Y. Acad. Sci., 151, 190 (1968).
23. Allet ВJeppesen P. G. У., Katagiri К. L, Delius H. Nature, 241, 120
(1973).
24. Allington W. B.t Aron C. G. ISCO Applications Research Bulletin, No. 4
(1971).
25. Allington W. B.} Aron C. GISCO Applications Research Bulletin, No. 10 (1973).
26. Allison J. H„ Agrawal H. C., Moore В. W. Anal. Biochem., 58, 592 (1974).
27. Alper C. A., Johnson A. M. Vox Sang. (Basel), 17, 445 (1969).
28. Alper С. ARosen F. S. Advanc. Immunol., 14, 251 (1971).
29. Alper C. A.t Boenisch 7\, Watson /. J. Exp. Med., 135, 69 (1972).
30. Alper C. A.} Geserick G.t Rittner Ch., Azen E. A., Goedde H. W., Teis-
berg P., Wieme R. Vox Sang. (Basel), 25, 18 (1973).
31. Alper C. A., Propp P. P., Watson L J. Clin. Invest., 47, 218 (1968).
32. Alpers D. H„ Glickman R. Anal. Biochem., 35, 314 (1970).
33. Alischul A. М., Evans W, J., Camery W, McCourtney E. J., Brown H. D. Life Sci., 3, 611 (1964).
34. Alvares A., Siekevitz Ph. Biochem. Biophys. Res. Commun., 54, 923 (1973).
35. Amaldi P. Anal. Biochem.t 50, 439 (1972).
36. Ames B. N., Hartman P. E., Jacob F. J. Mol. BioL, 7, 23 (1963).
37. Andary Т. IDabich D. Anal. Biochem,, 57, 457 (1974).
38. Anderson L. E., McClure W. O. Anal. Biochem., 51, 173 (1973).
39. Andersson L.-O.. Borg HMikaelsson M. FEBS Letters., 20, 199 (1972).
40. Anker H. S. FEBS Letters, 7, 293 (1970).
41. Annan W. D., Manson W. J. Dairy Res., 36, 259 (1969).
