Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гааль Э. -> "Электрофорез в разделении биологических макромолекул" -> 146

Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.

Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул — М.: Мир, 1982. — 448 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforezvrazdeleniibiologicheskih1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 185 >> Следующая

ляет выявить три варианта р-казеина А (А1, А2 и А3). Варианты -у-казеина генетически сцеплены с вариантами р-казеина А и В. В молоке гомозигот по аллелю, контролирующему р-ка-зеин С, не обнаруживается у-казеинов [488, 489].
При электрофоретическом анализе белков сыворотки молока нет необходимости применять диссоциирующие агенты. Чер-воне и др. [220] исследовали белки сыворотки коровьего молока с помощью электрофореза на ацетате целлюлозы или целло-геле в 0,04 М вероналовом буфере (pH 8,6). В обоих случаях они получили очень сходные результаты. Было выявлено пять фракций: ближе всех к аноду располагался сывороточный альбумин, за ним в виде двух четких полос следовали лактоглобулины А и В, а наиболее медленно мигрирующая зона соответствовала р-лактоглобулину В. Методом электрофореза на бумаге был обнаружен генетически детерминируемый полиморфизм р-лактоглобулина [59, 60]. Более поздние исследования, проведенные с применением электрофореза в гелях, привели к идентификации дополнительных вариантов этого белка. В настоящее время известны следующие варианты р-лактоглобулина: А, В, С и D. У коров австралийской породы обнаружен еще один вариант — р-лактоглобулин Драутмастер, отличающийся от варианта А лишь по содержанию углеводов [854]. р-Лакто-глобулин встречается только в молоке жвачных. Другой очень важный компонент сыворотки молока представлен а-лактальбу-мином. Этот белок не родствен альбумину сыворотки крови, и его физиологическая роль состоит в том, что он способствует превращению присутствующей в молочной железе галактозил-трансферазы в лактозосинтетазу [169]. При электрофорезе в крахмальном геле а-лактальбумин коровьевого молока разделяется на одну основную и три минорные зоны [573]. У некоторых пород наблюдается генетически детерминированный полиморфизм а-лактальбумина [103, 116]. Белл [101, 102] изучал белки сыворотки молока с помощью электрофореза в крахмальном геле с использованием натрий-боратного буфера (pH 8,5). Другие авторы [578, 579] применяли тонкий слой крахмального геля (0,15 см) и «полупрерывистую» буферную систему. Буфер, входящий в состав геля, содержал 14,4 мМ трис, 2,97 мМ лимонную кислоту, 2 мМ LiOH и 76 мМ Н3ВО3 (pH 7,7); электродный буфер состоял из 0,1 М LiOH и 0,38 Н3ВО3 (pH 8,4). Петерсон [996] описал электрофорез белков сыворотки молока в полиакриламидном геле, при этом он использовал 8%-ный гель в буфере, предложенном Беллом [101, 102] для электрофореза в крахмальном геле.
III. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ НУКЛЕИНОВЫХ КИСЛОТ И НУКЛЕОПРОТЕИДОВ
II 1.1. Электрофоретические методы разделения нуклеиновых кислот и полинуклеотидов
Хотя в составе нуклеиновых кислот имеется некоторое количество основных групп, эти соединения нельзя подвергать электрофорезу в виде катионов, так как при низких значениях pH высокомолекулярные нуклеиновые кислоты нерастворимы в воде. В нейтральной и щелочной средах молекулы нуклеиновых кислот заряжены отрицательно, поскольку их заряд определяется диссоциацией фосфатных групп. Оливера и др. [940] обнаружили, что в этом диапазоне значений pH электрофоретическая подвижность РНК и денатурированной ДНК в свободном растворе не зависит от их молекулярной массы. Такая закономерность объясняется постоянством отношения заряда молекулы к ее массе и указывает на то, что нуклеиновые кислоты невозможно разделить с помощью электрофореза с подвижной границей.
Для электрофоретического разделения различных полинуклеотидов используют эффект молекулярного сита, присущий целому ряду гелей. Детальные исследования показали, что посредством электрофореза в гелях можно получить данные о некоторых характеристиках молекул нуклеиновых кислот. Так, например, методом электрофореза можно определить молекулярную массу того или иного полинуклеотида и установить, является ли он рибо- или дезоксирибонуклеотидом. Кроме того, можно выяснить, состоит ли данная молекула из одной или двух полинуклеотидных цепей, а в случае ДНК определить, какую форму имеет молекула — линейную или кольцевую. Несмотря на существование более точных физических и химических методов определения указанных свойств, электрофорез в некоторых отношениях имеет преимущество перед ними. Оно состоит в том, что электрофоретические методы относительно просты, требуют сравнительно недорогого оборудования и могут быть использованы в тех случаях, когда для анализа доступно лишь небольшое количество неочищенного материала. Некоторые физические параметры разделенных нуклеиновых кислот изучают, не прибегая к их элюции из гелей. Например, Роз-нер и др. [1115] исследовали тепловую денатурацию нуклеиновых кислот, разделенных путем электрофореза в гелях. Фраг-
менты геля, содержащие анализируемые зоны, вырезали, промывали соответствующим раствором, вставляли в кварцевые трубки и с помощью спектрофотометра определяли изменения оптической плотности, вызванные нагреванием.
Перечисленные выше факты позволяют понять, почему, начиная с момента своего появления, электрофорез нуклеиновых кислот находит все более широкое применение в биохимии, генетике, вирусологии, микробиологии и других областях биологии.
Предыдущая << 1 .. 140 141 142 143 144 145 < 146 > 147 148 149 150 151 152 .. 185 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed