Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гааль Э. -> "Электрофорез в разделении биологических макромолекул" -> 144

Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.

Гааль Э., Медьеши Г., Верецкеи Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул — М.: Мир, 1982. — 448 c.
Скачать (прямая ссылка): elektroforezvrazdeleniibiologicheskih1982.djvu
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 185 >> Следующая

Рис. 114. Электрофорез в агарозном геле спинномозговой жидкости (СМЖ) и сыворотки крови, полученных от шести разных больных [772]. По краям электрофореграммы расположены образцы нормальной сыворотки, использованные в качестве, свидетелей. 1, 3, 5, 7, 9 н 11 — образцы концентрированной СМЖ, остальные номера — образцы сыворотки. 1 и 2 — образцы от больного с хронической миелопатией; 3 и 4, 5 и 6, 7 и 8, 9 и 10 — образцы от четырех больных с рассеянным склерозом; 11 и 12 — образцы от больного с опухолью центральной нервной системы. Стрелки, направленные вправо, указывают на дискретные зоны, присутствующие в СМЖ здоровых людей; стрелки направленные влево, указывают на зоны в углобулиновой области, отсутствующие у здоровых людей.
ном. Клайне и Штрох [685] применяли аналогичный электрофоретический метод [685] и окрашивание пунцовым S; электрофореграммы сканировали, не подвергая пленки специальной обработке, чтобы сделать их прозрачными. Гларер и Вагенер [441] применили метод, исключающий не только концентрирование образцов, но и окрашивание электрофореграмм. Они проводили электрофорез в агарозном геле в пирофосфатном буфере (pH 8,6; [i = 0,l), и электрофореграммы сразу же сканировали при 205 нм.
Диск-электрофорез сам по себе обеспечивает концентрирование образцов, происходящее в результате скачкообразных изменений pH и напряженности поля в концентрирующем геле. Это преимущество диск-электрофореза многие авторы использовали для исследования белков СМЖ без предварительного концентрирования образцов. Обычно для анализа вполне достаточно 0,4—0,7 мл жидкости [262], но в некоторых случаях можно наносить до 2 мл [1394]. При нанесении большого объема образца длина концентрирующего геля должна быть увеличена.
Рис. 115. Сравнение белков, содержащихся в СМЖ и сыворотке крови, методом ление — диск-электрофорез (Т—4,75 %); второе направление — электрофорез ванная СМЖ- На схеме Б зоны, помеченные звездочкой, соответствуют мальная сыворотка. Jin—p-липопротеид, Гп—гаптоглобин, М—
кислый а 1-гликопротеид (орозомукоид),
Несмотря на значительные преимущества методов, устраняющих этап концентрирования, без него, очевидно, нельзя обойтись в тех случаях, когда требуется детальный анализ белков СМЖ, включая минорные компоненты. Многие из этих белков можно обнаружить, повысив разрешающую способность электрофореза в полиакриламидном геле путем использования градиента концентрации геля [1454], особенно в преальбуминовой
двухмерного электрофореза в полиакриламидном геле [145]. Первое направ-на пластинах геля с градиентом концентрации 2—30%. А и Б. Концентриро-компонентам, которые, очевидно, присутствуют только в СМЖ. В и Г. Нор-макроглобулин, Ц — церулоплазмин, Тф — трансферрии, А — альбумин, КГп — ПА — тироксинсвязывающий преальбумин.
области. Чтобы достигнуть еще более высокого разрешения, применяют двухмерный электрофорез в полиакриламидном геле [1451, 1454]; таким путем в СМЖ удалось различить около 70 компонентов (рис. 115).
С помощью перекрестного иммуноэлектрофореза с антисывороткой против антигенов мозга человека в СМЖ было обнаружено девять антигенных компонентов, отсутствующих в нормальной плазме [139].
II.7.9. Белки мочи
Для нормальной мочи характерно низкое содержание белков, которое даже в физиологических условиях подвергается значительным колебаниям. При некоторых заболеваниях наблюдаются резкие качественные и количественные изменения белкового состава* мочи. В нормальной моче можно обнаружить многие белки плазмы [1149]. Обычно в моче отсутствуют фибриноген, липопротеиды низкой плотности и IgM. Для анализа белков мочи образцы приходится концентрировать тем или иным описанным выше методом (разд. II.7.8). Помимо обычных компонентов плазмы в моче обнаружены низкомолекулярные гликопротеиды, которые в плазме отсутствуют или встречаются в следовых количествах. Кроме того, в моче содержится образующийся в ткани почек высокомолекулярный гликопротеид (уромукоид/ гликопротеид Тамма — Хорсфолла), осаждаемый 0,58 М NaCl.
Электрофоретический анализ белков мочи проводят в основном с целью определения характера протеинурии. Низкомолекулярные белки (мол. масса ниже 20 000) проходят через клубочки почти без задержки, но на электрофореграммах они обнаруживаются в виде отдельных зон только в том случае, если повышается их концентрация в плазме или нарушается обратное всасывание этих белков в канальцах (канальцевая претеин-урия). На электрофореграммах преобладают белки с подвижностью (Х2- и р-глобулинов. Между трансферрином и р^-глобу-лином выявляется выраженная зона р2-микроглобулина [742]. Если в результате определенного заболевания повышается избирательная проницаемость базальной мембраны клубочков, то наблюдается иная картина распределения белков мочи (клубочковая протеинурия). Эта картина характеризуется повышенным содержанием альбуминовой фракции и одновременным увеличением концентрации ai-антитрипсина и трансферрина.
Белки мочи анализируют практически теми же методами, что и белки сыворотки. Описанные выше основные типы распределения белков можно различить с помощью любого электрофоретического метода, дающего достаточное разрешение белков плазмы, например с помощью электрофореза в агарозном геле или на ацетате целлюлозы. Можно также применять электрофорез в полиакриламидном геле в буфере с ДСН, так как при клубочковой протеинурии в моче преобладают белки со значительно более высокой молекулярной массой, чем при канальцевой протеинурии [1149].
Предыдущая << 1 .. 138 139 140 141 142 143 < 144 > 145 146 147 148 149 150 .. 185 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed