Электрофорез в разделении биологических макромолекул - Гааль Э.
Скачать (прямая ссылка):
Старт
I-
/3 преф а.
©
_1__________L-
I
I
/
Норма
Тип
II
©
III
IV
сификации типов гиперлипемии (рис. 112). Классификация гиперлжшмий основана на преобладании одной или двух фракций липопротеидов [400]. Тип III характеризуется наличием необычного липопро-теида: по скорости флотации он относится к ЛОНП, но при электрофорезе обладает подвижностью (3-глобулинов (флотирующий р-липопротеид). Такой лишо-протеид обнаруживается во всех случаях, когда наблюдается повышенный уровень ЛОНП [507], и, по всей вероятности, является нормальным продуктом обмена ЛОНП. Таким образом, высокое содержание
этого липопротеида 'при гиперлипемии типа III свидетельствует о количественном изменении обмена
ЛОНП, вероятно, обусловленном каким-то нарушением в механизме их распада. Электрофоретическими методами гиперлипемию типа III трудно отдифференцировать от гиперлипемии типа ПЬ, характеризующуюся повышенным содержанием в крови как р-, так и
пре-р-липопротеидов. Трудность связана с тем, что при гиперлипемии типа III зона p-липопротеидов часто расширена и при электрофорезе на бумаге, ацетате целлюлозы или в агарозном геле простирается до зоны пре-<р-липопротеидов (широкая р-фр акция). Преодолеть эту трудность можно путем сравнения электрофореграмм, полученных одним из указанных выше методов, с результатами электрофореза в полиакриламидном геле [830]. Виланд и Зайдель [1415] предложили еще более простой способ. Они использовали разную способность липолротеи-до© к осаждению полианионами и таким образом получили возможность обнаруживать после электрофореза пре-р-липо-протеиды (ЛОНП) независимо от их подвижности.
При электрофорезе в полиакриламидном геле для получения четких зон ЛОНП следует применять гели с очень низкой кон*
Рис. 112. Схема разделения липопротеидов, встречающихся при различных типах гиперлипемии, с помощью электрофореза в агарозном ге*ле.
Рис. 113. Скорость миграции различных фракций липопротеидов (Jin) при электрофорезе в полиакриламидном геле в зависимости от концентрации геля
[899].
центрацией. Реймонд и др. [1066] нашли, что концентрация геля не должна превышать 3,75%, тогда как Нараян [902] считает, что 3,75%-ный гель является оптимальным. Наито и др. [899] сообщили о достаточно хорошем разделении липопротеидов в диапазоне концентраций геля 2,8—4,07% с оптимумом при 3,6% (рис. 113). Маскет и др. [830] применяли разделяющий гель, содержавший 3% акриламида и 0,25% б^с-акрилами-да. Такая повышенная концентрация этого реагента приводила к улучшению механических свойств геля. В этих условиях хи-ломикроны остаются в стартовом геле, тогда как ЛОНП (пре-|}-липопротеиды) входят в разделяющий гель, но продвигаются в нем на незначительное расстояние или останавливаются в зоне, прилежащей к границе между концентрирующим и разделяющим гелями. ЛНП (p-липопротеиды) движутся несколько быстрее, поэтому относительное положение ЛОНП и ЛНП на элект-рофореграмме прямо противоположно тому, которое наблюдается при электрофорезе в среде, не обладающей свойствами молекулярного сита. (Таким образом, на основании подвижности ЛОНП в полиакриламидном геле в указанных выше условиях их можно называть пост-р-липопротеидами. Прэтт и Дейн-джерфилд [1032] ввели новый тип классификации липопротеидов, основанной на их подвижности в градиентном геле.)
В случае гиперлипемий типа III при электрофорезе в полиакриламидном геле нельзя обнаружить выраженной зоны р-ли-попротеидов, тогда как при электрофорезе тех же образцов на бумаге, ацетате целлюлозы или в агарозном геле ясно видна
зона с подвижностью p-липопротеидов. Путем комбинации этих двух разновидностей электрофореза удалось распознать данный тип гиперлипемии у 96% больных, у которых она была установлена методом ультрацентрифугирования. Недавно Го-дольфин и Стинсон [443] с помощью ИЭФ в полиакриламидном геле обнаружили липопротеид, который имеет ИЭТ, равную 5,44, и, вероятно, является характерным для гиперлипемии типа III [443].-
Нараян и др. [903] сообщили, что подклассы ЛНП (разделенные путем ультрацентрифугирования) выявляются в виде отдельных зон в 3%-ном полиакриламидном геле. В более концентрированных гелях удается обнаружить также и подклассы ЛВП [902, 1122]. В буфере, содержащем 4,1 "Ю-3 М лаурино-вую кислоту, можно различить 8—9 зон сц-липопротеидов [1330].
Из сказанного следует, что при электрофорезе в однородных гелях нельзя добиться максимального разрешения липопротеи-дов. Для получения более четкого разделения этих белков было предложено использовать ступенчатые градиенты концентрации геля: 3,5 и 7% [1445] или 3,25 и 7,5% [375], а также непрерывный градиент концентрации от 2 до 6,5% [1032]. В последнем случае ЛОНП хорошо отделяются от ЛНП, которые в свою очередь разделяются на один основной и несколько минорных компонентов. Таким образом, с помощью «прерывистого» или непрерывного градиента концентрации геля можно фракционировать как ЛНП, так и ЛВП.
